桦褐孔菌深层液体发酵及菌粉降血糖药效的初步研究

论文摘要

桦褐孔菌(Inonotus obliquus)是一类珍贵的大型的药用真菌,在俄罗斯和西伯利亚等国家已经使用了近百年了。桦褐孔菌具有抗氧化、抗肿瘤、抗艾滋病病毒、抗突变、提高免疫力、降血糖和降血脂等作用。为了研究桦褐孔菌发酵深层培养工艺,并对所得菌丝体进行药效考察,本研究首先从本公司保存的一株菌株为出发菌株,研究了它的最优的斜面培养基及菌株的复壮方法,确定了菌种斜面传代工艺后接着研究了以菌丝体干重为指标的液体深层发酵摇瓶小试和发酵罐中试工艺,并筛选出了最优发酵培养基配方,并初步了解了中试工艺下的桦褐孔菌胞外多糖和胞内多糖的含量,最后研究了桦褐孔菌菌粉对糖尿病小鼠的降血糖作用。得出的结论如下：1.在所选的几种常见的斜面培养基中,改良的PDA Ⅱ(马铃薯浸出粉20g/L,葡萄糖20 g/L, MgSO41.5 g/L, KH2PO4 3g/L,盐酸硫胺VB1 0.1 g/L,琼脂粉15 g/L)上生长的菌丝很白,毛绒状,菌丝非常饱满,该斜面是适合桦褐孔菌斜面生长的。2.确定了摇瓶的发酵工艺为培养温度28℃,转数150 rpm,摇瓶的接种量为3%(v/v)、转接时间为7天,摇瓶发酵周期为8天；并通过单因子实验确定了最优的发酵培养基配方为葡萄糖3%,玉米粉1.5%,黄豆粉2%,精氨酸0.1%,MgSO4 0.15%, KH2PO4 0.3%, pH6.0,该工艺条件下菌丝干重为23.3 g/L。中试工艺为一级发酵罐接种量为3%,二级发酵罐接种量均为10%,发酵周期均为8天。该中试工艺下的胞外多糖含量为17.93 mg/ml,而胞内多糖含量为5.39%。3.观察了桦褐孔菌菌粉对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病小鼠的影响,为桦褐孔菌成为防治糖尿病的菌类药物提供了基础。结果表明灌胃盐酸二甲双胍(195 mg/kg)的药物组血糖降低显著(P<0.01),而桦褐孔菌菌粉的低剂量组(200mg/kg)对降血糖降低不明显(P>0.05),高剂量组(400 mg/kg)血糖降低明显(P<0.05)。说明400 mg/kg的桦褐孔菌菌粉能够降低STZ诱导的糖尿病小鼠的空腹血糖,后经Ⅱ型糖尿病药效研究表明效果亦明显。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 第二章 桦褐孔菌深层液体发酵及菌粉降血糖药效的初步研究
• 2.1 前言
• 2.2 材料
• 2.2.1 菌株
• 2.2.2 主要试剂
• 2.2.3 培养基的配制
• 2.2.4 主要仪器与设备
• 2.3 方法
• 2.3.1 斜面培养基选择及优化
• 2.3.2 斜面传代能力考查
• 2.3.3 菌株的复壮与保藏
• 2.3.4 摇瓶发酵工艺研究
• 2.3.4.1 斜面的制备
• 2.3.4.2 发酵种子液的制备
• 2.3.4.3 种龄种量考察
• 2.3.4.4 发酵菌丝体干重的测定
• 2.3.4.5 同碳源对桦褐孔菌菌丝生长的影响
• 2.3.4.6 不同葡萄糖浓度对桦褐孔菌菌丝生长的影响
• 2.3.4.7 不同玉米粉浓度对桦褐孔菌菌丝生长的影响
• 2.3.4.8 不同氮源对桦褐孔菌菌丝生长的影响
• 2.3.4.9 不同黄豆粉浓度对桦褐孔菌菌丝生长的影响
• 2.3.4.10 不同pH对桦褐孔菌菌丝生长的影响
• 2.3.4.11 不同氨基酸对桦褐孔菌菌丝生长的影响
• 2.3.5 发酵罐中试培养
• 2.3.5.1 一级发酵罐实消
• 2.3.5.2 一级发酵罐接种及生长曲线的测定
• 2.3.5.3 一级转二级发酵移种时间的确定
• 2.3.5.4 二级发酵罐实消
• 2.3.5.5 移种管路消毒与移种
• 2.3.5.6 二级发酵罐发酵周期的测定
• 2.3.6 桦褐孔菌多糖的提取
• 2.3.6.1 胞外粗多糖的提取
• 2.3.6.2 胞内多糖的提取
• 2.3.6.3 多糖含量测定—苯联-硫酸法
• 2.3.6.4 还原糖的测定方法
• 2.3.6.5 总糖含量测定
• 2.3.7 桦褐孔菌治疗小鼠糖尿病的研究
• 2.4 结果
• 2.4.1 斜面培养基的选择与优化
• 2.4.2 菌种的衰退与复壮
• 2.4.3 种龄种量考察
• 2.4.4 不同碳源对桦褐孔菌菌丝生长的影响
• 2.4.5 不同葡萄糖浓度对桦褐孔菌菌丝生长的影响
• 2.4.6 不同玉米粉浓度对桦褐孔菌菌丝生长的影响
• 2.4.7 不同氮源对桦褐孔菌菌丝生长的影响
• 2.4.9 不同黄豆粉浓度对桦褐孔菌菌丝生长的影响
• 2.4.10 不同pH对桦褐孔菌菌丝生长的影响
• 2.4.11 不同氨基酸对桦褐孔菌菌丝生长的影响
• 2.4.12 一级发酵罐生长曲线测定
• 2.4.13 一级发酵移种时间的确定
• 2.4.14 二级发酵罐培养周期的测定
• 2.4.15 桦褐孔菌胞外多糖的测定
• 2.4.16 桦褐孔菌胞内多糖含量的测定
• 2.4.17 桦褐孔菌治疗小鼠糖尿病的研究
• 2.5 结果与展望
• 2.5.1 结果
• 2.5.2 展望与讨论
• 参考文献