论文摘要
背景：缺血后处理的概念是2003年Zhao等首次提出的，它是指在心肌长时间缺血后，于复灌初期立即给予心肌反复多次短暂的复灌／停灌，具有明显的对抗心脏缺血／复灌损伤的保护作用。但缺血后处理的心肌保护作用机制尚未完全清楚。近几年来的研究表明，缝隙连接（gapjunction）通讯参与缺血复灌心肌的保护作用。缝隙连接是存在于相邻细胞间的膜通道结构，由相邻的两个细胞质膜上的连接子相互衔接而成，缝隙连接对心肌细胞电同步兴奋和代谢耦联起着重要作用，同时缝隙连接通讯也受到一些药物的影响，如Heptanol。Heptanol是一种脂溶性的缝隙连接脱耦联剂，能可逆地抑制缝隙连接。我们前期的研究发现，Heptanol可以发挥类似心肌缺血预处理的效应。据报道，缺血后处理与缺血预处理存在一些共同的保护机制。我们假设，缝隙连接可能也参与缺血后处理的心肌保护作用。本实验旨在探讨缺血后处理和Heptanol处理在心肌缺血复灌损伤中的作用，以及缝隙连接是否参与缺血后处理的心肌保护作用。目的：1．在大鼠离体心脏和整体心脏缺血／复灌模型上，观察缺血后处理和Heptanol处理的心肌作用；2．观察缝隙连接在缺血后处理和Heptanol处理心肌保护作用中的地位和作用。方法：1．在体大鼠缺血／复灌模型和缺血后处理的方法大鼠麻醉固定，暴露心脏后，丝线结扎冠状动脉左前降支30min，恢复灌流120min作为缺血／复灌过程，在停灌后复灌即刻立即给予3次复灌／停灌循环，每次各10s，共计1min行缺血后处理。2．离体局部缺血／复灌模型和缺血后处理的方法离体灌流心脏结扎左冠状动脉前降支30min，恢复灌流120min作为缺血／复灌过程，在停灌后复灌即刻立即给予3次复灌／停灌循环，每次各10s，共计1min行缺血后处理。3．离体全心停灌／复灌模型和缺血后处理的方法离体灌流心脏全心停灌30min复灌120min，在停灌后复灌即刻立即给予6次全心复灌／停灌循环，每次各10s，共计2min行缺血后处理。4．左室功能评价连续记录复灌过程中左心室发展压（left ventricular developed pressure，LVDP）、心率（heart rate，HR）、心率与发展压的乘积（rate-pressure product，RPP）、左心室内压最大上升和下降速率(maximal rise／fall rate of left ventricular pressure，±dP／dtmax)等各项动力学指标，测定复灌各时间点单位时间的冠脉流量。5．灌流心脏流出液乳酸脱氢酶的测定在复灌5min、10min、20min收集冠脉流出液，用分光光度法测定乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）的含量。6．心律失常评分法用心律失常评分法对心律失常严重程度进行定量分析。7．心肌梗死面积测定采用TTC染色法测定梗死面积，扫描仪扫描后使用Image J软件计算梗死区面积占危险区面积的比例。8．心肌传导速度测定采用四电极法测定心肌传导速度，即将传导距离除以两对记录电极所记录到心外膜电图的起始点的时间差。结果：1．缺血后处理对缺血／复灌心肌的影响（1）在离体心脏灌流中，与I／R组相比，缺血后处理组LVDP、RPP明显增高、+dP／dtma增大、冠脉流量增多；复灌期间冠脉流出液中LDH含量降低、心肌梗死面积减小，复灌期间心律失常评分下降，复灌时心肌传导速度降低。（2）在整体大鼠心肌缺血／复灌中，缺血后处理组的心肌梗死面积明显减小，复灌期间心律失常评分下降。2．Heptanol处理对缺血／复灌心肌的影响（1） Heptanol预处理对缺血／复灌心肌的影响在离体心脏灌流中，各浓度Heptanol均使心肌梗死范围缩小，并呈剂量依从性；高浓度Heptanol在心肌缺血过程及其后120min的复灌过程中心律失常评分下降。在整体大鼠心脏，Heptanol可使心肌缺血过程及其后120min的再灌注过程中心律失常评分下降，中高剂量Heptanol均使心肌梗死面积缩小。（2） Heptanol后处理对缺血／复灌心肌的影响在离体心脏灌流中，各浓度Heptanol使心肌复灌过程中心律失常评分下降，高浓度Heptanol使心肌梗死范围缩小，并呈剂量依从性；中高浓度Heptanol降低心肌复灌的LDH含量，0.5、1mmol／L Heptanol降低心肌复灌时的传导速度，0.1mmol／L Heptanol降低心肌复灌早期的传导速度。在整体大鼠心脏，各剂量Heptanol均使心肌梗死面积缩小，中高剂量Heptanol降低复灌时心律失常评分。3．AAP10对Heptanol和缺血后处理心脏作用的影响（1） AAP10对心肌传导速度的影响1×10-6、1×10-7、1×10-8mol／L的AAP10均增加离体心脏心肌的传导速度，并呈剂量依从性。（2） AAP10对缺血／复灌心肌的作用与I／R组相比，AAP10+I／R组的RPP、LVDP、±dP／dtma和冠脉流量、LDH含量、心肌梗死面积无明显变化，但明显降低了复灌期各时间点的心律失常评分，增加复灌30min前的心肌传导速度。（3） AAP10减弱缺血后处理的心肌保护作用于复灌初期同时给予AAP10取消了缺血后处理增高复灌期RPP、LVDP、±dP／dtmax的作用，取消了缺血后处理增加冠脉流量和降低冠脉流出液中LDH释放的作用，也取消了缺血后处理缩小心肌梗死范围和降低心律失常评分的作用，复灌时心肌传导速度比缺血后处理组加快。（4） AAP10减弱Heptanol的心肌保护作用于复灌初期同时给予AAP10减弱了Heptanol缩小心肌梗死范围和降低心律失常评分的作用，减弱了Heptanol降低复灌初期的心肌传导速度。结论：1．在整体或离体大鼠心脏，缺血后处理、Heptanol处理均对缺血／复灌心肌有保护作用。2．缺血后处理、Heptanol处理的心肌保护作用可能与缺血／复灌心肌复灌时缝隙连接细胞间通讯的减弱有关。