蝉拟青霉杀虫作用的研究

论文摘要

蝉拟青霉既是名贵中药,又有较高的致病性。使用蝉拟青霉做材料研究它在生物防治上的开发价值,具有深远的意义。本文研究蝉拟青霉对蚕豆蚜虫和小菜蛾的杀虫作用。得出8株蝉拟青霉都具有不同程度的杀虫作用,其中GZDXIFR4611的杀虫效果最好。孢子悬液的最高致死率可达到88.7%。影响昆虫病原真菌毒力有酶的因素,本研究主要从酶的方面研究它的杀虫作用。所以对蝉拟青霉蛋白酶、几丁质酶、溶菌酶和酯酶的酶活力研究,在8种菌株中,GZDXIFR4611酯酶的活性明显比其它三种酶的活力高,初步得到蝉拟青霉酯酶与毒力有一定的相关性。为了更好的研究蝉拟青霉酯酶与杀虫作用的关系,优化产酯酶的条件,从而提高其产率。再进行分离纯化,对分离物质进行杀虫实验。筛选蝉拟青霉酯酶的最佳液体培养基:可溶性淀粉10g/L,酵母膏7.5g/L,K2HPO40.35g/L,MgSO4.7H2O0.35g/L。GZDXIFR4611在48小时产酯酶最多,酶的最适反应温度为40℃,最适pH为6.5,最适反应时间为40min,在25℃条件下,蝉拟青酶酯酶的半衰期约是58h,蝉拟青霉酯酶在40℃时稳定性最高。粗酶液经硫酸铵分级盐析,取40—70%硫酸铵饱和度下的蛋白质沉淀溶解,用Sephadex G-50柱层析脱盐,收集高活性管;使用Sephadex G-100对酶液进行分离纯化,也收集高活性管。我们得出酯酶收率是20.4%,纯化倍数是8.05。把分离纯化的每个阶段得到的酶液进行杀虫实验,得出通过Sephadex G-100过柱收集管的毒力效果最好,致死率可达到86.7%,说明蝉拟青霉酯酶有很大的毒力作用。研究了8株蝉拟青霉胞内几丁质酶、蛋白酶、溶菌酶活力,从中筛选出酶活力高的菌株（GZDXIFR3716）;并对3种酶的产酶条件进行了研究。结果表明,GZDXIFR3716几丁质酶、蛋白酶和溶菌酶含量最高的发酵时间分别为48h、60h和84h;3种酶的最适反应温度分别为50℃、40℃和40℃;3种酶的最适反应pH分别为6.0、7.0和5.0。

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SUMMARY

第一章前言

1 昆虫病原真菌的毒力

1.1 孢子或其它感染体的特性

1.2 孢子萌发和芽管的行为

1.3 有毒代谢产物

2 影响昆虫病原真菌毒力的因素

2.1 培养基

2.2 酶

2.3 菌种

2.4 温湿度

3 酶的应用

3.1 酯酶的应用

3.2 溶菌酶的应用

3.3 蛋白酶的应用

3.4 几丁质酶的应用

4 蝉拟青霉的应用

4.1 形态特征及分布

4.2 蝉花的化学成份

4.3 蝉花的药理作用

4.4 蝉花在生物防治方面的作用

5 展望

第二章蝉拟青霉高毒力菌株的筛选

一材料与方法

1 材料

2 方法

2.1 菌株培养

2.2 杀虫剂型的处理

2.3 杀虫方法

二结果和分析

1.8株蝉拟青霉对蚕豆蚜虫的致死率

2.4株蝉拟青霉对小菜蛾的致死率

3.对感染的蚜虫进行贴片观察

第三章蝉拟青霉高毒力菌株中酶的研究

一材料与方法

1 材料

2 方法

2.1 菌株培养:

2.2 标准曲线的建立

2.3 比较酯酶胞内酶与胞外酶的含量

2.4 筛选胞内酶活力高的菌株

2.5 蝉拟青霉GZDXIFR 4611和3716的生长曲线

2.6 蝉拟青霉酯酶产酶条件的研究

2.7 蝉拟青霉几丁质酶、蛋白酶、溶菌酶产酶条件的研究

二结果和分析

1.A-萘酚、N—乙酰氨基葡萄糖和酪氨酸标准曲线的建立

2.比较蝉拟青霉酯酶胞内酶与胞外酶的含量

3.8株蝉拟青霉胞内酶活力的筛选

4.菌株GZDXIFR3716和GZDXIFR4611的生长曲线

5.蝉拟青霉酯酶产酶条件结果

5.1 菌株GZDXIFR 4611产酯酶最优发酵培养基筛选结果

5.2 酯酶的生长曲线、温度、PH和反应时间对酯酶的影响

5.3 蝉拟青霉酯酶的热稳定性

5.4 蝉拟青霉酯酶的半衰期

6.蝉拟青霉几丁质酶、蛋白酶和溶菌酶产酶条件的结果

第四章蝉拟青霉酯酶的杀虫作用

一材料与方法

1 材料

2 方法

2.1 蛋白质含量测定的标准曲线的建立

2.2 蛋白质含量的测定

2.3 蝉拟青霉酯酶的分离提取

2.4 各步分离酯酶的溶液对蚜虫的致病力测试

二、结果和分析

1.蛋白质标准曲线的建立

2.蝉拟青霉酯酶的分离提取

2.1 硫酸铵分级盐析

2.2 SEPHADEX G-50柱层析脱盐

2.3 SEPHADEX G-100柱层析分离

2.4 蝉拟青霉酯酶的纯度和收率

3 各步分离酯酶的溶液对蚜虫的致病力测试结果

第五章讨论

致谢

参考文献

附录

蝉拟青霉杀虫作用的研究

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