论文摘要
目的：半胱氨酰白三烯（cysteinyl leukotrienes，CysLTs）是花生四烯酸经5-脂氧合酶（5-lipoxygenase，5-LOX）途径代谢产生的重要炎症介质，参与外周炎性疾病以及脑卒中、脑外伤、脑肿瘤等中枢神经系统疾病的病理生理过程。CysLTs的作用由CysLT1和CysLT2受体介导。已经初步证明，CysLTs启动受体后，通过激发细胞内贮存Ca2+释放而发挥效应。我们已经发现CysLT1受体参与大鼠和小鼠的脑缺血损伤。CysLT1受体有选择性拮抗剂，但存在非受体效应，还需要继续寻找新的化合物；而对于CysLT2受体尚无选择性拮抗剂，因此，对其功能了解较少。本研究目的为了建立细胞模型及筛选方法，初筛CysLT1受体拮抗剂，为进一步寻找新的化合物及研制新药提供基础。方法：选用分化后高表达CysLT1受体的人白血病细胞株dU937细胞，激动剂LTD4攻击后检测细胞内Ca2+浓度变化，作为CysLT1受体拮抗剂的筛选方法，初步筛选有拮抗剂活性的化合物，以CysLT1受体拮抗剂pranlukast和montelukast作为参照；并进一步在人脐静脉内皮细胞缺氧缺糖损伤（OGD）模型上观察初筛化合物抗损伤作用。结果：dU937细胞高表达CysLT1受体蛋白。阳性刺激物ATP 5×10-5M能显著升高dU937细胞内钙（30％）；LTD410-7M的作用约为ATP的56％。CysLT1受体拮抗剂pranlukast和montelukast能抑制LTD4诱导的dU937细胞内钙升高，IC50分别为9.2×10-8M和7.5×10-8M。新合成的化合物Dxw-1、10、11、12、13、19也能部分抑制LTD4诱导的钙信号，IC50在2.2×10-8M至2.4×10-7M之间，最大抑制率19％～23％。Dxw-10、11、12在10-6M对人脐静脉内皮细胞没有毒性作用，但也不能抑制OGD引起的损伤；而同浓度pranlukast有保护作用。结论：1．dU937细胞可以作为CysLT1受体细胞模型；在此细胞上确定了Ca2+测定条件，建立了初步筛选CysLT1受体拮抗剂的方法。2．CysLT1受体选择性拮抗剂pranlukast和montelucast能够抑制LTD4诱导的dU937细胞内钙升高，并能减轻内皮细胞OGD损伤；化合物Dxw-1、10、11、12、13、19能够抑制LTD4诱导的细胞内钙升高，具有一定的受体拮抗剂样活性，但Dxw-10、11、12不能减轻内皮细胞OGD损伤，是否为CysLT1受体拮抗剂还需要进一步验证。目的：星形细胞瘤是脑内常见的肿瘤，目前没有十分有效的疗法。恶性胶质瘤常用外科手术、放疗和化疗，但预后较差。青蒿素及其衍生物是安全有效的抗疟疾药物，近来发现其具有较好的抗肿瘤作用。能够选择性杀伤肿瘤细胞，而对正常细胞毒性很小。二氢青蒿素（dihydroartemisinin，DHA）是青蒿素在体内的主要活性代谢产物，其抗肿瘤活性大于青蒿琥酯和青蒿素。并且，DHA能够穿过血脑屏障，因而，可能对脑内肿瘤的治疗有一定作用。我们的实验是研究DHA对大鼠胶质瘤细胞（C6细胞）增殖和凋亡的影响。方法：在培养的C6细胞，加入DHA 1～125μmol／L作用24、48、72h。以台盼蓝染色计数和噻唑蓝（MTT）还原反应，观察细胞增殖和活性；以Hoechst 33342染色，观察细胞凋亡；以H2DCFDA氧化试验检测细胞内活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）变化。结果：（1）DHA 5-125μmol／L浓度及时间依赖性抑制C6细胞的增殖，作用48h后的IC50是23.4μmol／L。（2）5μmol／L DHA作用24h时后即可诱导凋亡（P＜0.05），48h后凋亡率可达到30％以上（P＜0.01）；25μmol／L凋亡率接近50％。（3）5～125μmol／L增高细胞内的ROS（P＜0.01），5μmol／L可增加ROS达1倍；25μmol／L可增加2倍左右；125μmol／L增加4倍以上。结论：1．DHA能够抑制C6细胞增殖，诱导其凋亡，其细胞毒作用与细胞内ROS增加相关。2．DHA能够杀伤肿瘤细胞，并能穿过血脑屏障，可能成为治疗脑内胶质瘤的有效成分。
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