罗格列酮对哮喘患者T淋巴细胞源性IL-10的影响及调节NF-κB的可能机制

论文摘要

目的1、观察支气管哮喘（简称哮喘）患者外周血T淋巴细胞分泌白细胞介素-10（interleukin-10，IL-10）的状态。2、观察罗格列酮对哮喘患者T淋巴细胞NF-kB活性的影响及可能机制。方法选取哮喘患者和健康自愿对照者各10名，抽取外周静脉血10ml用淋巴细胞分离液分离外周血PBMC（peripheral blood mononuclearcells，PBMC），制成PBMC细胞悬液，悬液贴壁培养2小时分离纯化T淋巴细胞并按如下分组：A1组(健康对照者T淋巴细胞原液组，即于含10％胎牛血清、100U／ml青霉素和100U／ml链霉素、万分之三谷氨酰胺及50μg／ml PHA的RPMI-1640培养基（完全培养基）中培养；A2组（哮喘患者T淋巴细胞原液组）；A3组（哮喘患者T淋巴细胞，在A2组基础上加终浓度为20μmol／1的罗格列酮）。A4组（哮喘患者T淋巴细胞，在A2组基础上加终浓度为20μmol／1的罗格列酮及终浓度为10μg／ml的IL-10抗体），细胞浓度均为1×106／ml。将上述分组细胞置于饱和湿度、37℃、含5％CO2培养箱中培养培养48小时，每次培养的同时都用其完全培养基做无细胞的空白对照组。然后用ELISA法测定培养上清液IL-10浓度，收集细胞并用细胞免疫化学染色检测T淋巴细胞内核因子-kB（nuclear factor-kappaB，NF-kB）活化情况。统计学方法用SPSS13.0统计软件进行统计分析，测定值采用均数±标准差（（?）±S）表示。在方差齐性基础上完全随机设计的多个样本均数比较采用F检验，完全随机设计的多个样本均数之间的两两比较采用最小显著差异t检验，并将哮喘T淋巴细胞之NF-kB活性与上清液IL-10浓度行直线相关分析，α=0.05，双侧P≤0.05有统计学意义。结果培养上清液IL-10浓度：A2组上清液IL-10浓度明显低于A1组（P＜0.05）；A3组上清液IL-10浓度明显高于A2组（P＜0.05），A1和A3组比较无差别（P＞0.05）；A4组上清液IL-10浓度均低于A1，A2，A3组，即A1，A3＞A2＞A4。T淋巴细胞NF-kB活化率：A2组T淋巴细胞NF-kB活化率明显高于A1组（P＜0.05）；A3组T淋巴细胞NF-kB活化率明显低于A2组（P＜0.05）；A2和A4组比较无差别（P＞0.05），即A2，A4＞A3＞A1。NF-kB活化率与培养上清液IL-10浓度的相关性：A2组T淋巴细胞NF-kB活性与A2组上清液IL-10浓度成负相关（r=—0.81，P＜0.01）；A3组T淋巴细胞NF-kB活性与A3组上清液IL-10浓度成负相关（r=—0.84，P＜0.01）；A4组T淋巴细胞NF-kB活性与A4组上清液IL-10浓度成负相关（r=—0.82，P＜0.01）。结论1、哮喘患者外周血T淋巴细胞分泌白细胞介素-10水平减低。2、哮喘患者T淋巴细胞NF-kB活性明显增高，可能与IL-10分泌减低有关。3、罗格列酮明显升高哮喘患者T淋巴细胞源性IL-10水平。4、罗格列酮可抑制T淋巴细胞NF-kB活性，其机制可能与升高IL-10水平有关。5、抗IL-10抗体能抑制T淋巴细胞源性IL-10的升高，可能与阻断IL-10分泌有关。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 略缩语
• 第一章 前言
• 第二章 材料、对象与方法
• 2.1 试剂与材料
• 2.2 研究对象
• 2.3 研究方法
• 2.4 统计方法
• 第三章 结果
• 3.1 细胞培养形态学观察
• 3.2 T淋巴细胞培养上清液IL-10浓度（见表1和附录图3-8）
• 3.3 细胞免疫化学染色检测T淋巴细胞NF-κB活化率（见表1和附录图3-3至3-7、附录图3-9）
• 3.4 A2,A3,A4组培养上清液IL-10浓度与相应各组T淋巴细胞NF-κB活性的相关性分析
• 3.5 抗IL-10抗体抑制T淋巴细胞源性IL-10的升高（见表1）
• 第四章 讨论
• 4.1 细胞培养的评估
• 4.2 IL-10在哮喘发病机制中的作用及意义
• 4.3 NF-κB在哮喘发病机制中的作用及意义
• 4.4 罗格列酮对哮喘T淋巴细胞源性IL-10,NF-κB活性的影响和可能机制
• 第五章 结论
• 第六章 参考文献
• 第七章 附录
• 综述
• 致谢