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四川山地乌骨鸡IL-2、15、18、IFN-γ基因克隆测序及分子佐剂效应研究

2020-11-23阅读(182)

四川山地乌骨鸡IL-2、15、18、IFN-γ基因克隆测序及分子佐剂效应研究

论文摘要

鸡白细胞介素2（IL-2）、IL-15、IL-18及干扰素-γ（IFN-γ）是鸡体内重要的细胞因子，在鸡抗病和免疫应答反应中有重要作用。四川山地乌骨鸡是地方优良品种，具有生长快，适应性广、抗病力强等特点。目前有关四川山地乌骨鸡的IL-2、IL-15、IL-18及IFN-γ及其免疫学特性的研究，国内外均未见报道。克隆四川山地乌骨鸡IL-2、IL-15、IL-18及IFN-γ基因，研制分子免疫佐剂及其对疫苗的佐剂效应，提高疫苗免疫应答，有重要学术价值和应用前景。 1．本试验用RT-PCR方法从conA刺激的四川山地乌骨鸡的外周血淋巴细胞总RNA扩增了鸡白细胞介素2及γ-干扰素基因的cDNA。将分离的cDNA片段克隆到PMD18-T载体，进行序列测定分析。结果表明：鸡IL-2基因全部的开放阅读框432bp，与Genbank数据库中的序列进行同源性比较发现：山地乌骨鸡IL-2基因与其他品种鸡IL-2基因核苷酸同源性为98.4-99.5％。鸡IFN-γ基因全部的开放阅读框495bp，与GeneBank上报道的核苷酸序列同源性为97.4％-100％。四川山地乌骨鸡IL-2和IFN-γ克隆在国内外尚未见报道，本试验所克隆的鸡IL-2及IFN-γ基因，丰富了IL-2及IFN-γ基因的资源库，为进一步研究提供了基础材料。 2．用RT-PCR方法从conA刺激四川山地乌骨鸡的脾淋巴细胞总RNA扩增了鸡白细胞介素15基因的cDNA。将分离cDNA片段的克隆到PMD18-T载体，进行序列测定分析。结果表明：鸡IL-15基因基因全部的开放阅读框564bp，与Genbank上序列比较发现，山地乌骨鸡IL-15与其他序列同源性为98.9-99.8％。目前很少关于鸡IL-15的研究报道，四川山地乌骨鸡IL-15克隆在国内外尚未见报道，本试验为进一步研究鸡IL-15的疫苗佐剂效应奠定的基础。 3．本研究应用RT-PCR方法从conA刺激2h后四川山地乌骨鸡的脾脏组织总RNA扩增了IL-18基因的cDNA，将分离cDNA片段的克隆到PMD18-T载体，进行序列测定分析。结果表明：鸡IL-18基因全部的开放阅读框597bp，与GeneBank上报道的核苷酸序列同源性为96.5-100％。其中与Schneider等报道的序列完全一致。四川山地乌骨鸡IL-18克隆在国内外尚未见报道，本研究为鸡IL-18疫苗佐剂效应的研究提供了物质基础。 4．分别双酶切得到IL-2、IFN-γ、IL-15、IL-18 DNA片段，将其亚克隆入真核

论文目录

  • 中文摘要
  • 文献综述
  • 细胞因子及其疫苗佐剂效应研究进展
  • 1.细胞因子研究进展
  • 2.细胞因子的免疫佐剂效应
  • 3.细胞因子佐剂效应的机理
  • 4.强化细胞因子免疫佐剂作用新途径
  • 5.用于疫苗佐剂的禽细胞因子
  • 6.细胞因子作为佐剂的展望
  • 前言
  • 第一章 四川山地乌骨鸡IL-2及IFN-γ基因的克隆与序列分析
  • 摘要
  • 1.引言
  • 2.材料和方法
  • 3.结果
  • 3.1 总RNA的完整性鉴定
  • 3.2 鸡脾淋巴细胞IL-2及IFN-γ基因的RT-PCR
  • 3.3 IL-2及IFN-γ基因菌落PCR及酶切鉴定
  • 3.4 IL-2及IFN-γcDNA克隆片段序列分析
  • 4.讨论
  • 第二章 四川山地乌骨鸡IL-15基因的克隆与序列分析
  • 摘要
  • 1.引言
  • 2.材料和方法
  • 3.结果
  • 3.1 总RNA的完整性鉴定
  • 3.2 鸡脾淋巴细胞IL-15基因的RT-PCR
  • 3.3 IL-15基因菌落PCR及酶切鉴定
  • 3.4 IL-15 cDNA克隆片段序列分析
  • 4.讨论
  • 第三章 四川山地乌骨鸡IL-18基因的克隆与序列分析
  • 摘要
  • 1.引言
  • 2.材料和方法
  • 3.结果
  • 3.1 总RNA的完整性鉴定
  • 3.2 鸡脾组织IL-18基因的RT-PCR
  • 3.3 IL-18基因菌落PCR及酶切鉴定
  • 3.4 IL-18 cDNA片段序列分析
  • 4.讨论
  • 第四章 四川山地乌骨鸡IL-2、IL-15、IL-18及IFN-γ真核表达质粒构建
  • 摘要
  • 1.引言
  • 2.材料和方法
  • 3.结果
  • 3.1 IL-2、IL-15、IL-18及IFN-γ基因基因的PCR获取
  • 3.2 重组质粒pDNAIL-2、pDNAIL-15、pDNAINF-γ、pDNAIL-18双酶切鉴定
  • 4.讨论
  • 第五章 pDNAIL-2、pDNAIL-15、pDNAIL-18及pDNAIFN-γ分子佐剂制备及其对IBV DNA疫苗佐剂效应研究
  • 摘要
  • 1.引言
  • 2.材料和方法
  • 3.结果
  • 3.1 分子佐剂制备
  • 3.2 IBV DNA-pDNAIL2、IBV DNA-pDNAIL15、IBV DNA-pDNAIL18及IBV DNA-pDNAIFN-γ免疫后体液免疫测定结果
  • 3.3 IBV DNA-pDNAIL2、IBV DNA-pDNAIL15、IBV DNA-pDNAIL18及IBV DNA-pDNAIFN-γ免疫后CD4+和CD8+淋巴细胞百分含量测定结果
  • 3.4 IBV攻毒保护实验
  • 4.讨论
  • 第六章 分子佐剂pDNAIL-2和pDNAIL-15对禽流感灭活疫苗佐剂效应研究
  • 摘要
  • 1.引言
  • 2.材料和方法
  • 3.结果
  • 3.1 分子佐剂制备
  • 3.2 AI-pDNAIL2、AI-pDNAIL15免疫后HI抗体测定结果
  • 3.3 AI-pDNAIL2、AI-pDNAIL15免疫后CD4+和CD8+淋巴细胞百分含量测定结果
  • 4.讨论
  • 结论
  • 致谢
  • 参考文献
  • ABSTRACT
  • 在读期间发表论文

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