论文摘要
目的:本试验旨在通过复制2型糖尿病大鼠模型,测定大鼠可溶性E-选择素、糖化血红蛋白、空腹血糖的数值,了解三者的动态变化,探讨E-选择素与糖化血红蛋白、血糖之间的关系及E-选择素在糖尿病血管性并发症发生、发展中的作用机制,为糖尿病血管性并发症的预防和治疗提供新思路。方法:健康7周龄清洁级近交系wistar大鼠120只,体重180-220g,雌雄各半,购进后适应性喂养1周,大鼠随机分为2组:正常对照组（control group,CON） 50只,实验组（trial group,TRI）70只,各组大鼠均为雌雄各半。正常对照组大鼠喂以普通饲料,实验组大鼠喂以高热量饲料。4周后,将两组大鼠同时禁食8小时,然后实验组大鼠小剂量（30mg/kg）腹腔注射1%链脲佐菌素（溶于0.1mmol/l柠檬酸钠缓冲液,pH4.4）;正常对照组大鼠腹腔注射等量柠檬酸钠缓冲液（0.1mmol/l,pH4.4）。1周后所有大鼠做口服葡萄糖耐量试验:取FBG≥7.0mmol/l和（或）2hBG≥11.1mmol/l者为造模成功。TRI组共有61只造模成功,成模率87.1%。从中随机选取50只,雌雄各半,纳入正式实验,为糖尿病组（DM group,DM）。入组大鼠每2周尾静脉血测一次空腹血糖和体重（body weight,BW）。分别于正式试验后0周（M0）、4周（M4）、8周（M8）、12周（M12）、16周（M16）每组随机选取8只大鼠（雌雄各半）,尾静脉取血1μl测糖化血红蛋白（HbA1c）;然后用10%水合氯醛麻醉,下腔静脉取血5-7ml,注入普通试管,室温下静置1小时,血液自然凝固,3000转/分离心10分钟,取上清液,-80℃超低温冰箱保存,待标本收集齐全后同批采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定可溶性E-选择素（sE-selectin）浓度。采用SPSS11.5医学软件进行统计学处理分析,所有数据在列表时均以X±s表示,对所测定结果进行正态性及方差齐性检验,组间比较采用完全随机设计的单因素方差分析和q检验,变量相关关系采用直线相关分析,以P值小于0.05认为有统计学意义。结果1实验过程中,无动物意外死亡。成模前正常组大鼠体重稳定增长,血糖处于正常水平（3.46±0.33mmol/l）;实验组大鼠体重增加较正常组快,成模前血糖亦处于正常水平（4.45±0.46mmol/l）。2正式实验后正常组大鼠随周龄增长,体重稳定增加;空腹血糖值稳定,处于正常水平,各时间段之间无明显差别（P>0.05）,sE-selectin浓度及HbA1c无显著变化（P>0.05）（见附表1）。3 DM组大鼠在整个实验过程中,体重在M0-M8内稳定增加,M8后增加缓慢甚至降低,与正常组同时段比较无统计学差异（见附表2;附图1）,空腹血糖维持在较高水平（FBG>15mmol/l）（见附表3;附图2）。4 DM组大鼠HbA1c逐渐升高,由M0时的5.33±0.40%渐增至M16时的11.00±0.65%,且分别于M8,M16周时明显较前一时间点升高,有统计学差异（见附表4;附图3）。5 DM组大鼠0周,4周,8周,12周,16周时血清可溶性E-选择素（sE-selectin）浓度均高于正常对照组,且有统计学差异（p<0.05）。随着糖尿病大鼠周龄的增加,可溶性E-选择素浓度逐渐升高,由22.66±2.19ng/ml渐增至47.41±3.89ng/ml,且在8周,16周时的可溶性E-选择素浓度较前明显增高,有统计学差异（P<0.05）,而4周,12周时可溶性E-选择素浓度均较前一时间点无统计学差异（P>0.01）（见附表5;附图4）。6 HbA1c与sE-selectin在试验过程中变化趋势一致,两者呈明显正相关关系（p<0.01） （见附表6;附图5）。结论本研究结果显示2型糖尿病大鼠血清可溶性E-选择素（sE-selectin）的浓度随着病程的进展逐渐增加,且与反映血糖水平的糖化血红蛋白（HbA1c）呈正相关。2型糖尿病大鼠HbA1c>5%时可溶性E-选择素浓度开始升高,HbA1c>8%时可溶性E-选择素浓度明显升高,这将为2型糖尿病及其血管并发症的早期防治和发病机制的研究提供理论依据。sE-selectin浓度的增加是由于高血糖导致糖基化终产物（AGEs）增加,刺激大量炎性细胞因子生成,进而诱导E-selectin的表达。E-selectin浓度的明显增加,促进了白细胞黏附于血管内皮细胞,参与了糖尿病大血管并发症的发生、发展;同时,E-selectin促进白细胞的激活,释放氧自由基,损伤内皮导致血小板聚积,微小血栓形成,并刺激血管平滑肌细胞增生,诱导和促进了糖尿病微血管并发症的发生发展。因此,对糖尿病病人进行sE-selectin的监测有助于评价病情及估计预后。严格控制HbA1c和早期应用抗粘附分子（抗E-选择素）单克隆抗体降低E-选择素的表达,间接降低白细胞的黏附功能,从而预防糖尿病血管并发症的发生发展,提高糖尿病的整体治疗水平。