论文摘要
目的 通过分析原发性肝癌、癌旁肝组织、慢性乙型肝炎组织、正常肝组织中人胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）基因启动子甲基化状态,探讨其演变在肝癌发生、发展过程中的作用。 方法采集手术切除的肝癌及配对的癌旁肝组织12例、慢性乙型肝炎肝穿刺活检组织10例、正常肝组织7例,均经病理学证实;培养三株肝癌细胞系（BEL7402、SMMC7721、HepG2）及胎肝细胞系L02;提取基因组DNA为模板,巢式PCR扩增IGF-Ⅱ基因启动子（P1、P2、P3、P4）,肝癌组织IGF-Ⅱ启动子扩增产物测序;甲基化敏感的限制性内切酶HpaⅡ和不敏感的限制性内切酶MspⅠ消化基因组DNA,酶切产物为模板,扩增IGF-Ⅱ基因启动子;亚硫酸氢钠修饰基因组DNA,甲基化特异性PCR（MSP）检测各启动子的甲基化状态。 结果肝癌组织IGF-Ⅱ启动子序列与MEDLINE提供的正常序列（NT009308）一致;75%HCC（9/12）、67%癌旁肝组织（8/12）和细胞系的IGF-Ⅱ启动子P1甲基化,而慢性乙型肝炎组织、正常肝组织只有20%（2/10）、14%（1/7）;所有肝癌组织、癌旁肝组织和细胞系P3不同程度去甲基化,慢性乙型肝炎组织、正常肝组织分别为40%（4/10）和29%（2/7）;所有肝癌组织、癌旁肝组织和细胞系P4不同程度去甲基化,慢性乙型肝炎组织为10%（1/10）、正常肝组织14%（1/7）;不同组织间P2甲基化率无差异;正常肝组织、慢性乙型肝炎组织间各启动子甲基化率无差异;IGF-Ⅱ启动子甲基化状态与肝癌分化程度、肿瘤大小无关。 结论HCC发生、发展过程中IGF-Ⅱ基因启动子活性异常可能与基因缺失、突变无关;肝癌组织、癌旁肝组织、肝癌细胞系、胎肝细胞系IGF-Ⅱ基因启动子P1甲基化,P3、P4去甲基化,可能是肝癌IGF-Ⅱ基因成人型启动子P1失活和胚胎型启动子P3、P4激活的原因;HBV感染与IGF-Ⅱ启动子甲基化状态无关;肝癌IGF-Ⅱ基因启动子甲基化状态与其分化程度、肿瘤大小无关。因此IGF一Ⅱ基因启动子甲基化状态改变可能是肝癌发生、发展过程中的一个关键环节。
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标签：肝细胞癌论文; 胰岛素样生长因子论文; 启动子论文; 甲基化论文;