论文摘要
目的：双酚A（Bisphenol A，BPA）是一种常见的环境内分泌干扰物（Environmental endocrine disruptors，EEDs），对女性生殖内分泌系统有潜在的影响。本文通过大鼠卵巢内膜间质细胞及颗粒细胞的原代培养体系，研究BPA对卵泡内膜细胞睾酮生成和对细胞色素P45017α羟化酶（P450c17）、胆固醇侧链裂解酶（P450scc）和类固醇激素急性调节蛋白（StAR）mRNA的影响；以及研究BPA对颗粒细胞激素生成及芳香化酶（P450arom）、胆固醇侧链裂解酶（P450scc）和类固醇激素急性调节蛋白（StAR）mRNA的影响，探讨BPA对女性生殖系统激素生成的影响机制，论证环境内分泌干扰物BPA影响女性生殖系统生长，发育，疾病产生的可能机理。方法：分别采用大鼠的卵泡内膜间质细胞、颗粒细胞进行体外原代培养，培养72 h后以0、10-7、10-6、10-5、10-4 M五个不同浓度的BPA作用细胞，继续培养48 h，收集细胞培养液，用超敏感的固相放射免疫方法测定内膜间质细胞生成的睾酮浓度及颗粒细胞分泌的雌二醇、孕酮的水平。沉淀细胞，提取细胞总RNA，反转录为cDNA，采用荧光实时RT-PCR（TaqMan.assay）方法测定卵泡内膜细胞P450c17a、P450Scc二种酶和StAR mRNA表达水平及颗粒细胞P450arom、P450Scc二种酶和StAR mRNA表达水平的变化。结果：BPA刺激原代培养的卵泡内膜间质细胞睾酮的分泌，培养液中睾酮水平显著升高（p＜0.05）。睾酮合成相关的酶的基因表达水平也升高，在BPA 10-4M剂量组出现统计学意义（p＜0.05）。StAR的表达也显著增加（p＜0.05）。原代培养的颗粒细胞孕酮分泌量随BPA浓度的增加而增加（p＜0.05），但在10-4 M剂量组其浓度出现陡降（p＜0.01）；而雌二醇的分泌量则随BPA浓度的增加而下降（p＜0.01）。雌孕激素生成相关基因P450arom mRNA表达显著降低；P450Scc表达量在10-7M到10-5M组逐渐升高（p＜0.05），而10-4组却出现显著降低（p＜0.01）。StAR mRNA表达则有不同程度的增高（p＜0.05）。结论：BPA能直接作用于卵巢内膜间质细胞及颗粒细胞：通过诱导P450c17a，P450Scc等相关酶的表达增加、以及增加类固醇合成的限速因子-StAR的表达，增加内膜细胞睾酮的合成；通过作用于P450arom，P450Scc等相关酶的表达以及类固醇合成的限速因子-StAR的表达而干扰颗粒细胞雌孕激素的分泌。故生物体如果暴露于一定量的BPA，很可能导致生殖内分泌系统的紊乱从而产生一些内分泌疾病。其中一部分原因可能是通过影响卵巢激素生成酶的表达而造成女性卵巢激素生成水平的异常，从而使下丘脑-垂体-卵巢轴的正常调节机制发生改变所造成的。