论文摘要
目的探讨p38MAPK信号转导通路在17β-雌二醇（17β-E2）、葛根素（PUE）和白藜芦醇（RES）促成骨细胞（OB）增殖、分化、抑凋亡中的作用。方法1.用酶消化法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,观察细胞形态,碱性磷酸酶（ALP）染色和矿化结节染色鉴定OB。2.采用第二代细胞,接种24h后分为对照组（Control）;不同浓度(10-8-10-6mol·L-1)的17β-E2、PUE和RES组;含阻断剂组17β-E2+SB、PUE+SB和RES+SB,先加入SB203580(10μmol·L-1)作用30分钟预先阻断p38MAPK信号转导通路,再加入上述浓度的17β-E2、PUE和RES,培养72h后用MTT法测定细胞的增殖能力,PNPP法检测ALP活性;茜素红染色计数矿化结节,测定钙（Ca）沉积量;反映OB矿化能力。3.细胞培养8d后采用RT-PCR半定量法测定10-8mol·L-1含与不含阻断剂的17β-E2、PUE和RES组及对照组的Ⅰ型胶原（CollⅠ）mRNA表达,反映向OB分化状况。4.第二代OB,接种24h后换无血清培养并分为对照组,10-8mol·L-1含与不含阻断剂的17β-E2、PUE和RES组,培养72h后在Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪上分析细胞早期凋亡。结果1.与对照组相比,17β-E2、PUE和RES各浓度MTT值均显著增高（P＜0.05,P＜0.01）,17β-E2+SB、PUE+SB和RES+SB各浓度MTT值仍显著增高（P＜0.05,P＜0.01）,与不含SB组相近;2.与对照组相比,17β-E2、PUE和RES各浓度ALP活性显著增高（P＜0.05,P＜0.01）,17β-E2+SB、PUE+SB和RES+SB各浓度ALP活性显著下降（P＜0.01）;3.与对照组相比,17β-E2、PUE和RES各浓度矿化结节数目及钙含量显著增高（P＜0.05,P＜0.01）,17β-E2+SB、PUE+SB和RES+SB各组矿化结节数目及钙含量显著下降（P＜0.01）;4.RT-PCR结果显示,与对照组相比,17β-E2、PUE和RES组细胞的CollⅠ的mRNA表达明显增强（P＜0.05）,含SB各组CollⅠmRNA表达明显受到抑制（P＜0.01）;5.流式细胞仪分析结果显示,17β-E2、PUE和RES以及17β-E2+SB、PUE+SB和RES+SB组OB早期凋亡率较对照组明显降低（P＜0.05）,含SB与不含SB各组相同。结论17β-E2、PUE和RES具有促进OB的增殖、分化、矿化和Ⅰ型胶原表达并抑制其凋亡作用,p38MAPK信号转导通路在17β-E2、PUE和RES促OB的分化、矿化和Ⅰ型胶原的表达过程中发挥重要作用,而对其促OB的增殖和抑制凋亡的作用无明显影响。
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