人血小板冻干前负载海藻糖及冻干再水化后特性研究

论文摘要

目的 研究人血小板冻干前负载海藻糖技术与方法,筛选合适负载条件,可逆性抑制血小板激活,保护血小板功能。并以此检测血小板冻干再水化后特性。 方法 应用硫酸-蒽酮反应,定量检测载入到血小板胞内的海藻糖,绘制血小板胞内海藻糖浓度及负载效率随温度、时间、胞外海藻糖浓度变化曲线,制定出合适负载海藻糖条件。使用APACT-2型血小板聚集仪,分别检测血小板负载海藻糖前后聚集反应性变化。使用流式细胞仪分别测定血小板在自身血浆和负载缓冲液中负载海藻糖前后、在含有和未含有DMSO（2%）溶液的缓冲液中负载海藻糖后,血小板膜表面糖蛋白CD62P、PAC-1的表达。应用硫酸-蒽酮反应,测定血小板在含有和未含有DMSO（2%）缓冲液中,37℃条件下,负载海藻糖4h后的胞内海藻糖浓度。用激光共聚焦荧光显微镜观察分析荧光黄CH（LYCH）被负载入血小板内的量及分布随DMSO（2%）的添加、负载温度、及负载时间变化的趋势。分别使用流式细胞仪和硫酸-蒽酮反应,测定分析不同浓度可逆性激活抑制剂PGE1和腺苷添加后,血小板膜表面CD62P、PAC-1的表达和血小板负载海藻糖效率。用血细胞计数仪检测再水化冻干血小板计数回收率随冻干液中胞外海藻糖、人血清白蛋白浓度、及室温放置时间的变化趋势。使用APACT-2型血小板聚集仪分别检测新鲜和再水化冻干血小板对四种不同浓度诱导剂的聚集反应,检测冻干液中胞内外海藻糖浓度对冻干再水化血小板聚集反应的影响。使用流式细胞仪分别检测分析胞内、外海藻糖浓度及低浓度DMSO溶液的添加对再水化冻干血小板膜表面CD62P、PAC-1表达的影响。用全自动血凝仪检测富含血小板血浆（PRP）冻干再水化后不稳定凝血因子Ⅷ和V活性变化。结果 （1）建立了血小板胞内海藻糖提取和定量测定方法。37℃时,4h,胞外海藻糖浓度<50mmol/L为冻干前血小板负载海藻糖合适条件。（2）血小板负载海藻糖前后聚集反应性无显著性差别（P>0.05）。在含有可逆性激活抑制剂腺苷（5mmol/L）和PGE1（10μg/ml）的缓冲液中负载海藻糖

论文目录

• 英文缩略词表
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 人血小板冻干前负载海藻糖研究
• 第一节 载入血小板内海藻糖定量测定方法的建立和评价
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第二节 人血小板冻干前负载海藻糖实验条件筛选
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第三节 冻干前负载海藻糖过程对血小板体外激活和聚集反应的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第四节 DMSO在人血小板冻干前负载海藻糖过程中对血小板的保护作用
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第二部分 可逆性血小板激活抑制剂的研究
• 第一节 腺昔对血小板激活抑制作用研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 1对血小板激活的抑制作用研究'>第二节 前列腺素E₁对血小板激活的抑制作用研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第三部分 血小板冻干再水化后特性初步研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 小结
• 综述
• 附录
• 攻读学位期间发表文章
• 致谢