三生饮对大鼠局灶性脑缺血Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

论文题目: 三生饮对大鼠局灶性脑缺血Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

论文类型: 硕士论文

论文专业: 中医内科学

作者: 王媛媛

导师: 胡曼菁

关键词: 三生饮,局灶性脑缺血再灌注,免疫组化法

文献来源: 东南大学

发表年度: 2005

论文摘要: 研究背景人口老龄化是世界各国普遍的发展趋势,遂之而来的有关老年病的防治日益成为严重的社会问题。脑卒中、冠心病、糖尿病是老年人的多发病、常见病,尤其是脑卒中,具有发病率高、病死率高、致残率高和复发率高等特点,对社会及家庭造成了沉重的负担。其中缺血性卒中占发病率的60%-80%,尽管有溶栓等早期治疗手段,但在早期能接受治疗的人数少之又少,再加上溶栓药物的副作用,使得缺血性卒中的治疗缺少切实有效的方法。随着分子生物学的发展,缺血后神经元特异性的基因表达成为关注焦点,促进凋亡抑制基因表达,逆转迟发性神经元损伤成为药物改善脑缺血性损伤的新的依据。中国传统医学几千年积累了大量针对卒中有效而快捷的经验方,三生饮即是宋代官方医书《太平惠民和剂局方》中所转载《易简方》的治疗卒中的代表方剂之一,现代研究表明三生饮具有自由基清除剂及Ca2+拮抗剂样作用;能抗缺血、增加脑血流量,具有降低动静脉氧分压差的作用。因此,对三生饮治疗缺血性脑卒中的作用机制的研究可为寻找有效的药物作用靶点提供理论依据。目的实验研究三生饮对大鼠局灶性脑缺血再灌注后梗塞体积及细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法实验分为两部分:①建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,采用TTC染色法测定大鼠缺血再灌注24h梗塞体积,比较正常组、模型组与三生饮各治疗剂量组梗塞体积的差异。②建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,采用SP免疫组织化学方法,检测缺血再灌注后3h、6h、12h、24h、3d大鼠大脑皮质的Bcl-2、Bax免疫反应阳性细胞平均计数,比较模型组与三生饮治疗组免疫阳性细胞数量的差别。结果模型组及三生饮治疗各组大鼠在缺血再灌注24h额顶叶皮质及纹状体外侧均出现无染色的梗塞区,模型组体积较三生饮治疗三组大,具显著性差异(P<0.05);三生饮高、中、低剂量组之间梗塞体积没有统计学差异(P>0.05)。2.模型组及三生饮治疗组大鼠缺血再灌注后Bcl-2蛋白表达均呈现先升后降的规律,模型组Bcl-2表达高峰位于再灌注6h,三生饮治疗组Bcl-2表达高峰位于再灌注12h;峰值表达后模型组Bcl-2蛋白表达减少幅度较大,表达量明显少于三生饮治疗组(P<0.05)。3.模型组及三生饮治疗组大鼠缺血再灌注后Bax蛋白表达亦呈现先升后降的规律,两组峰值表达时间均在再灌注24h左右,蛋白表达量两组没有显著性差异(P>0.05)。结论1.局灶性脑缺血后,缺血区及半暗带区凋亡基因及凋亡抑制基因相互作用,其蛋白的表达呈现一定的规律性。以Bcl-2及其家族成员Bax为观察指标发现,缺血再灌注后即引起Bcl-2及Bax蛋白的表达增多,随再灌注时间延长,呈现先升后降变化规律。由于脑组织对缺血损伤的敏感性,缺血区细胞最终走向死亡。2.三生饮治疗缺血再灌注损伤,可以减小梗塞体积,起到脑保护作用。3.三生饮有增加凋亡抑制基因Bcl-2表达作用,通过增加Bcl-2/Bax比例,减少细胞凋亡,但不能阻止凋亡的发生,说明三生饮治疗脑缺血损伤机理不仅仅在于提高某一保护性基因的表达,而可能是在多个环节,通过多种途径、多个靶点共同起到脑保护作用。

论文目录:

中文摘要

英文摘要

前言

第一章 文献综述

1.1 前言

1.2 中药抗脑缺血机制概论

1.3 常用的单味药及其有效成分抗脑缺血机制

1.3.1 活血化瘀药

1.3.2 解表药

1.3.3 补益药

1.4 常用中药复方制剂抗脑缺血机制

1.4.1 补阳还五汤

1.4.2 脉络宁

1.4.3 复方丹参注射

1.5 中药抗脑缺血研究中存在的问题

参考文献

第二章 理论探讨

2.1 中医对脑的认识

2.2 中医对中风的认识

2.3 对中风病因病机的认识

2.4 对中风治则的认识

2.5 三生饮概述

2.5.1 三生饮配伍意义

2.5.2 三生饮治证的病机要点

2.5.3 三生饮治疗脑血管疾病研究进展

第三章 材料与方法

3.1 实验材料

3.1.1 研究对象

3.1.2 主要药品、试剂及配制

3.1.3 主要仪器

3.2 实验方法

3.2.1 实验模型的制作

3.2.2 动物分组

3.2.3 动物处理和组织切片制备

3.2.4 组织切片的处理

3.2.5 结果观察及数据处理

第四章 结果

4.1 模型制作结果

4.1.1 缺血模型的行为学鉴定

4.2 HE染色结果

4.3 TTC染色结果

4.4 Bcl-2免疫组化结果

4.4.1 模型组 Bcl-2 阳性细胞数变化

4.4.2 三生饮治疗组 Bcl-2 阳性细胞数变化

4.4.3 三生饮治疗组与模型组 Bcl-2 阳性细胞数比较

4.5 Bax免疫组化结果

第五章 讨论

5.1 局灶性脑缺血再灌注模型的制作与评估

5.2 脑缺血后神经细胞的凋亡

5.3 细胞凋亡与Bcl-2家族

5.3.1 Bcl-2 家族

5.3.2 Bcl-2 和 Bax

5.4 三生饮对缺血再灌注模型梗死体积的影响

5.5 三生饮对 Bcl-2 和 Bax 的影响

5.5.1 Bcl-2 阳性细胞数的变化

5.5.2 Bax 阳性细胞数的变化

5.6 三生饮的作用机制探讨

5.7 存在问题及展望

结论

致谢

参考文献

作者简介

发布时间: 2007-06-11

参考文献

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