论文摘要
人凝血酶原复合物浓制剂（Prothrombin Complex Concentrate，PCC，亦称PPSB）是一种主要含有凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ的血液制品，泛称因子Ⅸ浓制剂。PCC是乙型血友病的重要治疗替代药物，目前主要用进口DEAE Sephadex A50葡聚糖类凝胶型树脂以批式吸附的方法来制备。由于凝胶型树脂机械强度差、生产过程中损失率高、间歇开放性生产操作繁琐、容易染菌及操作人员的生物安全性等限制，使得现在PCC制品生产成本高，限制了PCC制品的产量及其在临床中的应用。因此，研制开发机械强度高、吸附性能优良、成本低廉的人工合成分离介质并将其应用于连续、封闭的柱层析PCC纯化的新工艺，以提高PCC制品的产量和质量并降低生产成本，就成为十分迫切和有意义的工作。本文以PCC纯制品为研究对象，首先对实验室制备的不同大孔阴离子树脂吸附PCC的静态吸附量和吸附速率进行考察，筛选出了吸附性能优良的CG-6树脂并对其物性和结构进行了测定。然后考察了CG-6树脂对PCC的吸附平衡，计算并分析了吸附过程中的吸附动力学和热力学行为，并研究了不同因素对固定床条件下CG-6吸附PCC的影响；最后对CG-6从血浆中分离纯化PCC进行了初步研究。研究结果如下：通过静态吸附实验，CG-6树脂对PCC的吸附量达65．337mg／g，吸附率超过87％，远高于其它其它合成树脂；对CG-6树脂的结构和物性测定结果表明，CG-6平均粒径为165．89μm，平均孔径为153．57nm，为典型的大孔树脂结构。CG-6对PCC的吸附特性研究表明，CG-6适合在磷酸盐缓冲环境中吸附PCC，缓冲液浓度、pH值和离子强度对吸附平衡有着较大的影响：pH值的升高有利于平衡吸附量的增大，而缓冲液浓度和离子强度的增大则降低了平衡吸附量；吸附平衡可以用Langmuir方程描述，吸附焓变为115．1kJ／mol、熵变△S为2．37（15℃）、20．97（20℃）、23．11（25℃）、37．32（30℃）kJ·mol-1·K-1，吉布斯自由能变化△G分别为-0．54（15℃）、-5．93（20℃）、-6．66（25℃）、-11．20（30℃）kJ·mol-1。；用拟二级方程对吸附过程进行拟和，通过计算求得吸附反应速率常数为0．00103g／mg·min；CG-6在固定床内对凝血酶原复合物（PCC）溶液的吸附穿透行为的考察结果表明：流速、进样浓度和高径比对PCC在CG-6上的吸附效率有着显著影响，在考察范围内，随着流速的下降，吸附效率从51．45％增加到73．98％，而进样浓度的降低使吸附效率从32．14％增加到61．64％；高径比的增加也会提高CG-6对PCC的吸附效率，但继续增大高径比则会降低树脂的利用率。对CG-6吸附PCC机理的初步探讨表明，CG-6树脂带有大量的离子交换基团，而吸附PCC所需的比表面积和孔结构并不占优势，因此，在CG-6吸附PCC过程中离子交换机理占有绝对的优势。通过对穿透过程中流出液pH值考察，表明CG-6在对PCC的吸附过程中孔结构和比表面积并不占优势，吸附机理以离子交换为主。初步考察CG-6对血浆中对PCC的分离纯化效果，并对洗脱样进行了活性测定，在0．8mol／L和1．2mol／L NaCl洗脱样中PCC比活分别达到了0．383和1．08IU／mg，与原料血浆相比，PCC纯化倍数可分别达到40倍和112倍，说明CG-6对血浆中的PCC有着较好的纯化效果。作为一种新型大孔阴离子交换树脂，CG-6具有良好的蛋白吸附性能，可以作为一种蛋白质纯化分离介质。通过对CG-6分离纯化凝血酶原复合物的研究表明，CG-6在血浆中对PCC有较好的吸附性能，分离得到的PCC比活较高，有较好的纯化效果，可以对CG-6在PCC分离纯化新工艺开发中的应用作进一步的研究。
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标签：凝血酶原复合物论文; 大孔阴离子交换树脂论文; 蛋白纯化论文; 吸附动力学论文;