靶向Survivin反义寡核苷酸对MCF-7乳腺癌细胞系Survivin mRNA及紫杉醇药物敏感性的影响

论文摘要

研究背景与目的Survivin属于IAP家族成员,特异的高表达于人类大多数肿瘤组织,并且与肿瘤细胞的凋亡、增殖及其耐药性的产生密切相关。本研究探讨靶向survivin基因的反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide ASODN）对MCF-7人乳腺癌细胞系增殖、凋亡及药物敏感性等生物学行为的影响及其可能的机制。研究方法采用脂质体介导Survivin-ASODN转染MCF-7细胞,RT-PCR方法检测MCF-7细胞中Survivin mRNA的表达,MTT比色法检测细胞增殖能力及对紫杉醇的敏感性,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。研究结果（1）Survivin-ASODN转染MCF-7细胞48h后,可使其survivin mRNA表达下调,在一定范围内抑制效应随浓度增加而增强,A200组下调至86.83%,A400组下调至76.72%,A600组下调至58.49%。与正常对照组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）。不同浓度反义转染组间相比差异均有统计学意义（P＜0.05）。（2）Survivin-ASODN转染MCF-7后可抑制细胞的增殖,随着ASODN浓度和作用时间的增加,抑制率逐渐增高,A200、A400、A600组48h时的增殖抑制率分别为22.25%、49.30%和58.62%;A600组24、48和72h时的增殖抑制率分别为39.60%、61.03%和70.74%。不同时间点之间和不同浓度组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。（3）Survivin-ASODN转染MCF-7后发生细胞周期阻滞,A600组细胞24h主要阻滞于G2/M期,G2/M期占（40.58±2.07）%,而正常对照组、脂质体组和正义组G2/M期分别占（21.95±0.62）%、（20.29±0.78）%和（25.37±1.47）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。A600组细胞凋亡率较高,凋亡率达（15.23±1.01）%,正常对照组、脂质体组及正义组凋亡率分别为（5.09±0.37）%、（5.25±0.61）%、（6.31±0.72）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。（4）紫杉醇作用于MCF-7细胞6h后,可使其survivin mRNA表达明显增强,从0h的0.66±0.09提高至1.26±0.11,12h达到较高的水平至2.34±0.22,Survivin表达的增强利于肿瘤细胞逃避紫杉醇诱导的细胞凋亡,增加肿瘤耐药的机会,作用24h后MCF-7细胞的survivin mRNA表达较前减低为1.01±0.29,48h时表达明显减弱为0.32±0.09,差异均有统计学意义（P＜0.05）。（5）紫杉醇处理6h后,正常组、脂质体组、正义组细胞survivin mRNA表达均明显增强,未加药组与加药组Survivin mRNA的相对含量分别为0.66±0.09、1.26±0.11;0.66±0.12、1.29±0.11;0.65±0.08、1.24±0.14,差异有统计学意义（P＜0.05）;A600组细胞加药后Survivin mRNA上调幅度低,未加药组与加药组Survivin mRNA相对含量为0.38±0.11和0.51±0.13,且A600加药组表达水平明显低于正常加药组、脂质体加药组、正义加药组上调后的表达水平,差异有统计学意义（P＜0.05）（6）紫杉醇对ASODN转染的MCF-7细胞组增殖抑制率明显增高,抑制率达（82.30±5.26）%,与正常对照组（36.93±4.20）%相比,差异有统计学意义（P＜0.05）。反义转染组细胞对药物的敏感性增加。研究结论survivin基因ASODN转染MCF-7细胞后,有效下调Survivin的表达,细胞周期阻滞于G2/M期,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡;紫杉醇作用早期,Survivin表达增强提高肿瘤细胞抵抗药物诱导凋亡的能力;survivin表达下调提高细胞对药物的敏感性。Survivin靶向治疗有可能成为乳腺癌治疗的重要途径之一。

论文目录

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• 文献综述
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