猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的研究

论文摘要

本试验对猪卵母细胞不同状态、不同培养基、不同添加物在体外成熟体系中的作用及不同的电激活参数、不同激活方法、不同培养液在孤雌激活中的激活效率进行了研究,研究目的在于完善猪卵母细胞体外成熟体系、提高卵母细胞体外成熟率及探索出适宜的孤雌激活方法。结果如下:1小、中、大（<3mm,3-6mm,> 6mm）三组卵泡卵母细胞体外成熟率依次为65.5﹪、81.6﹪、81.8﹪（P<0.05）。A级与B级卵丘扩展率为100%、52.8%,差异显著（P<0.05）,但第一极体排出率（81.6%、79.3%）无显著差异（P>0.05）,两者在卵丘扩展率和极体排出率上显著高于C级（P<0.05）。2 TCM 199和NCSU-23两种培养基培养猪卵母细胞,结果NCSU-23与TCM199对B级以上卵母细胞的培养中成熟率分别为80.6%,79.8%,差异不显著（P>0.05）。3以NCSU-23培养液分别培养B级以上卵母细胞36h,40h,44h,48h,结果显示,在培养36h后,第一极体排出率极低,为7.3%,44h为最高,差异显著（P<0.05）。可见,44 h是最适合于猪卵母细胞体外成熟的培养时间,体外成熟率达83%4以不同电场强度（100 V/mm、150 V/mm、200 V/mm、250 V/mm）、脉冲时间（20μs、30μs、40μs、60μs、80μs）、电脉冲次数（1次、2次、3次）的电激活方法及电激活（电场强度为200 V/mm,脉冲时间为60μs,激活次数为1次）联合化学处理（CHX、6-DMAP和CHX+6-DMAP）方法,研究对猪卵母细胞孤雌活化的影响。电激活猪卵母细胞时,在200 V/mm,60 us,1次激活的条件下其卵裂率和囊胚率最高。电激活联合CHX、6-DMAP、CHX+6-DMAP化学处理时,在孤雌激活后期的卵裂率分别为69.17%,82.31%和79.67%,囊胚率分别为24.17%,39.46%和39.84%,在统计学上,各处理间无显著差异。5三种培养基（NCSU-23、TCM-199和B2）培养猪孤雌胚,结果为,NCSU-23、TCM-199和B2的卵裂率分别为82.05%、81.5%、82.35%,差异不显著（P>0.05）。B2的囊胚率（40.48%）明显高于TCM-199培养液（27.73%）,与NCSU-23培养液（37.5%）的囊胚率没有明显差异（P>0.05）。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 文献综述
• 第一节 猪卵母细胞体外成熟的研究进展
• 1 引言
• 2 哺乳动物卵母细胞体外成熟机理的研究
• 3 影响猪卵巢卵母细胞体外成熟的因素
• 第二节 猪卵母细胞孤雌激活的研究进展
• 1 引言
• 2 孤雌激活的方法
• 3 孤雌激活的机理
• 4 孤雌胚的核型
• 5 孤雌激活应用的前景
• 第二章 实验部分
• 实验一 猪卵母细胞体外成熟的研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 实验二 猪卵母细胞的孤雌激活
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文情况