论文题目: 竹叶提取物及荭草苷抗心肌缺血作用及其机制探讨
论文类型: 博士论文
论文专业: 药理学
作者: 付晓春
导师: 王敏伟
关键词: 竹叶提取物,荭草苷,缺血,再灌,缺氧,给氧,自由基,扩血管,内皮,一氧化氮,家兔主动脉,凋亡细胞,线粒体
文献来源: 沈阳药科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 竹叶Phyllostachys nigra （Lodd．eX．Lind-1 Munro．L），具有抗自由基和抗氧化的作用，但对其心血管方面的药理作用国内外文献均未见报道。目前我们从竹叶中提取四种黄酮糖苷：荭草苷，异荭草苷，牡荆苷，异牡荆苷，关于这些成分的心血管药理作用也未见报道。鉴于此，本文对竹叶提取物（Bamboo Leaf Extract，BLE）及其四种黄酮糖苷进行了心血管方面的药理研究。 本文采用常压耐缺氧小鼠生存时间、夹闭气管小鼠心电消失时间、豚鼠离体心脏的冠脉流量、注射垂体后叶素及结扎大鼠冠状动脉所致的心肌缺血、花生四烯酸诱导的家兔血小板聚集及犬心肌缺血/再灌血流动力学、血清酶学及犬实验性心肌梗死等模型观察BLE对心肌缺血、缺氧的保护作用。结果表明，BLE（4.5，9，18g/kg）能显著延长小鼠常压耐缺氧条件下的存活时间及夹闭气管小鼠心电消失时间；BLE（3，6，12g/kg）能拮抗注射垂体后叶素及结扎大鼠冠状动脉所致的心肌缺血；BLE（0.5，1，2g/mL）能显著抑制家兔的血小板聚集及增加冠脉流量；BLE（1，2，4 g/kg）明显改善犬心脏血流动力学，可使心肌缺血程度（∑-ST）及心肌缺血范围（N-ST）降低，并可使血清心肌酶如乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸磷酸激酶（CK）降低，超氧化物歧化酶（SOD）升高。说明其保护缺血心肌的作用与降低耗氧量、抑制氧自由基的产生和抗氧化功能增强有关。 采用体外培养的大鼠胎鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型，研究了BLE对心肌细胞缺氧-复氧损伤的影响。心肌细胞缺氧120min再复氧60min后，测定LDH及SOD活性、NO的含量、心肌细胞Ca2+和丙二醛（MDA）浓度。采用MTT法测定心肌细胞的线粒体脱氢酶的活性，并进一步研究BLE对KC1、NE引起细胞内钙变化的影响。结果表明，BLE(10-1，10-2，10-4，10-6，10-5g·L-1)可明显提高细胞的存活率，并增加SOD的活性，降低LDH的活性及抑制MDA的生成，提高NO的含量，降低Ca2+的含量。与维拉帕米相似，BLE对KC1以及NE引起的细胞内钙升高均有抑制作用，并且对电压依赖性钙通道和受体操控性钙通道均有阻断作用。 采用离体家兔主动脉条，观察了荭草苷（0.1μM-30μM）的舒张血管作用及其作用机制。结果表明，荭草苷的血管舒张作用在去内皮的动脉条显著被抑制，在
论文目录:
摘要
ABSTRACT
序言
第一章 竹叶提取物对实验性心肌缺血的保护作用
1.前言
2.实验材料
2.1 药品及试剂
2.2 仪器设备
2.3 动物
3.实验方法
3.1 小鼠常压耐缺氧实验
3.2 对夹闭气管小鼠心电消失时间的影响
3.3 豚鼠离体心脏冠脉流量试验
3.4 垂体后叶素所致大鼠心肌缺血试验
3.5 对结扎冠脉所致大鼠的心肌缺血的作用
3.6 对花生四烯酸诱导的家兔血小板聚集的功能的影响
3.7 对犬心肌缺血/再灌犬血流动力学及血清酶学的影响
3.8 竹叶提取物对犬实验性心肌梗死的影响
4.实验结果
4.1 对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响
4.2 对夹闭气管小鼠心电消失时间的影响
4.3 对豚鼠离体心脏冠脉流量的影响
4.4 对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血的影响
4.5 对结扎冠脉所致大鼠的心肌缺血的作用
4.6 对家兔体外血小板聚集的影响
4.7 对犬心肌缺血/再灌血流动力学及血清酶学的影响
4.8 竹叶提取物对犬实验性心肌梗死的影响
5.讨论
第二章 竹叶提取物对体外培养的大鼠心肌细胞缺氧/给氧损伤的影响
1.前言
2.实验材料
2.1 药品与试剂
2.2 实验仪器设备
2.3 实验动物
3.实验方法
3.1 乳鼠心肌细胞培养
3.2 心肌细胞损伤模型制备
3.3 观察指标
3.3.1 形态学的改变
3.3.2 LDH活性测定
3.3.3 MTT法测定心肌细胞的代谢率
3.3.4 NO的测定
3.3.5 SOD活力测定
3.3.6 MDA含量测定
3.3.7 细胞内钙的测定
3.3.8 对KC1、NE引起细胞内钙变化的影响
4.实验结果
4.1 心肌细胞形态学观察
4.2 对缺氧-复氧心肌细胞培养液上清LDH含量影响
4.3 对缺氧-复氧心肌细胞代谢率的影响
4.4 对缺氧-复氧心肌细胞NO的影响
4.5 对缺氧-复氧心肌细胞SOD活性的影响
4.6 竹叶提取物对缺氧-复氧心肌细胞MDA含量的影响
4.7 竹叶提取物对缺氧-复氧心肌细胞内钙含量的影响
4.8 对KC1引起细胞内钙变化的影响
4.9 对NE引起细胞内钙变化的影响
5.讨论
第三章 竹叶提取物及其活性成分对离体家兔主动脉条的影响
1.前言
2.实验材料
2.1 药品与试剂
2.2 仪器与设备
2.3 实验动物
3.实验方法
3.1 对离体家兔主动脉条的影响
3.2 竹叶提取物中四种活性成分对离体家兔主动脉条的影响
3.3 检测内皮依赖的血管舒张介质
3.4 NO含量的测定
3.5 cGMP和cAMP含量的测定
3.6 荭草苷对NE,CaCl_2和KC1的量效曲线的影响
3.7 对苯肾上腺素引起的快速收缩及依赖性收缩反应的影响
4.实验结果
4.1 竹叶提取物对离体家兔主动脉条的影响
4.2 竹叶提取物中四种活性成分对离体家兔主动脉条的影响
4.3 检测内皮依赖的血管舒张介质
4.4 NO含量的测定
4.5 cGMP和cAMP含量的测定
4.6 荭草苷对NE,CaCl_2 and KC1的量效曲线的影响
4.7 对苯肾上腺素引起的快速收缩及依赖性收缩反应的影响
5.讨论
第四章 荭草苷抗自由基活性的研究
1.前言
2.实验材料
2.1 药品与试剂
2.2 实验仪器设备
2.3 实验动物
3.实验方法
3.1 乳鼠心肌细胞培养
3.2 心肌细胞损伤模型制备
3.3 观察指标
3.3.1 荭草苷,异荭草苷,牡荆苷,异牡荆苷对心肌细胞代谢率的影响
3.3.2 荭草苷对心肌细胞SOD活性及MDA含量的影响
3.3.3 荭草苷对培养基质乳酸脱氢酶活性(LDH)的影响
3.3.4 荭草苷对缺氧/复氧心肌细胞内钙含量的影响
4.结果
4.1 荭草苷,异荭草苷,牡荆苷,异牡荆苷对MTT代谢率的影响
4.2 荭草苷对缺氧/复氧心肌细胞培养液上清LDH含量影响
4.3 荭草苷对缺氧/复氧心肌细胞SOD活性的影响
4.4 荭草苷对缺氧/复氧心肌细胞MDA含量的影响
4.5 荭草苷对缺氧/复氧心肌细胞内钙含量的影响
5.讨论
第五章 荭草苷抗心肌细胞凋亡作用的研究
1.前言
2.实验材料
2.1 药品与试剂
2.2 实验仪器设备
2.3 实验动物
3.实验方法
3.1 大鼠体内心脏缺血/再灌
3.2 心肌的超微结构观察
3.3 TUNEL实验
3.4 免疫组化检测凋亡相关的蛋白
3.5 DNA电泳检测心肌细胞凋亡
3.6 提取心肌细胞
3.7 流式细胞技术检测心肌细胞凋亡
3.8 Western Blotting分析凋亡相关的蛋白
3.9 统计方法
4.结果
4.1 心肌细胞超微结构观察结果
4.2 心肌细胞凋亡的评价
4.3 免疫组化检测结果分析
4.4 流式细胞术检测结果
4.5 Western Blotting方法检测凋亡相关蛋白结果
5.讨论
结论
参考文献
致谢
附：发表论文
发布时间: 2006-11-27
参考文献
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