论文摘要
脂肪酸合酶（E.C.2.1.3.85，FAS）是参与体内能量代谢的一种重要的酶，它以FASⅠ和FASⅡ两种形式存在。近期的研究发现FASⅠ是治疗肥胖症和新的癌症化疗的潜在双重靶点，而FASⅡ（FabG）抑制剂则有可能成为新型的抗生素；3T3—L1前脂肪细胞是向脂肪细胞的形态转变前体，抑制前脂肪细胞分化即可减少脂肪细胞的增殖。四川边茶（康砖）是黑茶的一个主要品种，本论文以对边茶提取物对FASⅠ和FabG的抑制作用，对FASⅠ抑制动力学特征、作用方式和部位，最佳提取条件及边茶泡茶方式的效率，以及对3T3—L1前脂肪细胞分化的抑制等问题进行了探索研究，并进行了相关的分析讨论。实验结果表明：1．边茶最佳萃取剂为50％左右的乙醇，在常温下2～3 h即可接近最佳萃取效果。虽然和红茶及绿茶相似，但边茶的纯水萃取效果要好于绿茶和红茶，且温度较高的水提取效果更好；2．开水浸泡边茶的方法1小时可获得最佳萃取条件下29％的抑制能力，二次泡茶1小时还可以得到类似的抑制能力，两次即可得到超过50％的有效物，比绿茶的开水浸泡效率高出1倍；3．四川边茶的提取物能够抑制动物脂肪酸合酶（FASⅠ）的活性，不同年份的边茶提取物对FAS全反应的抑制能力不同，1972年的边茶提取物对FAS的抑制能力最低(IC50值为14.85μg／ml)，2001年的边茶对FAS的抑制作用最强(IC50值为5.31μg／ml)，抑制能力约是1972年的3倍；4．边茶提取物对FASⅠ还表现出较强时间依赖性的不可逆失活作用，其一级失活速度常数分别为：0.127（min．mg tea／ml）-1（快相）和12.1×10-3（min．mgtea／ml）-1（慢相）。且对酮酰还原反应（KR）有较强抑制，但对没有全反应显著，说明KR功能域不是边茶提取物抑制FASⅠ的主要作用部位；5．边茶提取物与底物乙酰辅酶A和丙二酸单酰辅酶A的竞争性质都是竞争性与非竞争性的混合型，这与绿茶对底物的竞争性关系有所差异，这说明两大茶类对FASⅠ的抑制有效物有所不同；6．边茶提取物对FASⅡ的β酮酰还原酶（FabG）的抑制作用较强，这与对FASⅠ中酮酰还原反应（KR）的抑制效果相似；但对FabG的抑制和对FASⅠ中KR的抑制能力却不一致，提取物对两者失活的表现一级速度常数分别为0.116（min．mg tea／ml）-1和0.164（min．mg tea／ml）-1。去掉抑制剂浓度的影响，其二级速度常数k2分别为5.48×10-3（min．mg tea／ml）-1和6.76×10-3（min．mg tea／ml）-1。这可能与它们结构上的差异有关；7．边茶萃取液对抑制3T3—L1前脂肪细胞分化、抑制脂肪积累具有一定的作用。但对其抑制表现与对FASⅠ和对FabG的抑制有较大差异，在抑制FAS活性实验中效果较好的2001年、1985年等边茶对3T3—L1前脂肪细胞的抑制能力与分化对照组差异却不明显；而抑制能力较差的1972年边茶效果最好，是分化对照组的86.8％，与对照有显著差异（P＜0.05）。8．边茶提取物分离去除茶黄素和茶红素后，含茶褐素组分的抑制能力与边茶提取物的抑制能力接近，说明这一组分仍保持了原有的大部分抑制活性。由于这个组分并未提纯，茶褐素只占一部分，因此分析茶褐素可能是边茶中抑制FAS的主要活性成分。