VEGF启动子驱动的双自杀基因治疗大肠癌的实验研究

论文摘要

实验研究目的: 基因治疗是恶性肿瘤治疗的有效手段之一,但基因治疗仍存在转导效率低、对肿瘤杀伤的作用不强、靶向性不高以及安全性等许多问题,为了提高基因治疗的靶向性及对肿瘤的杀伤作用,本研究利用已构建好的携有血管内皮细胞生长因子启动子（VEGFP）并含有大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）基因和Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）基因的重组腺病毒（Ad）载体,在体外和体内分别感染大肠癌LOVO细胞,并给予前药进行治疗实验,以研究Ad-VEGFp-CDglyTK基因治疗系统对大肠癌细胞的体外杀伤作用和体内抑瘤作用,同时对于该治疗系统的安全性作初步探讨,为进一步开展肿瘤的双自杀基因治疗和靶向治疗探索新的道路。 实验研究方法: Ad-VEGFp-CDglyTK对大肠癌细胞的体外杀伤作用:分别复苏和扩增含有荧光蛋白（GFP）报告基因重组腺病毒Ad-VEGFp-CDglyTK、Ad-CMVp-CD、Ad-CMVp-TK、Ad-CMVp-CdglyTK,再用氯化铯密度梯度离心法纯化重组腺病毒,并进行重组腺病毒的滴度测定,确认每种重组腺病毒滴度在1×109pfu水平;然后用这些重组腺病毒分别感染大肠癌LOVO细胞,给予前药5-氟胞嘧啶（5-FC）和更昔洛韦（GCV）进行作用一定的时间,分别测定LOVO细胞的集落形成、细胞存活率及

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 VEGF启动子驱动的双自杀基因重组腺病毒对大肠癌细胞的体外杀伤作用
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 腺病毒、细胞株和试剂
• 1.1.2 配制的主要溶液
• 1.1.3 主要仪器
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 重组腺病毒复苏和扩增
• 1.2.2 氯化铯密度梯度离心法纯化
• 1.2.3 病毒滴度测定
• 1.2.4 细胞克隆形成实验
• 1.2.5 细胞存活率测定
• 1.2.6 旁观者效应实验
• 1.2.7 细胞形态学变化观察
• 1.3 结果
• 1.3.1 细胞克隆形成率
• 1.3.2 细胞存活率
• 1.3.3 旁观者效应
• 1.3.4 细胞形态学变化观察
• 1.4 讨论
• 第二章 VEGF启动子驱动的双自杀基因重组腺病毒的体内抑瘤作用
• 2.1 实验材料和方法
• 2.1.1 主要材料
• 2.1.2 裸鼠移植瘤治疗实验
• 2.1.3 肿瘤细胞形态学变化观察
• 2.2 结果
• 2.2.1 裸鼠移植瘤治疗实验结果
• 2.2.2 肿瘤细胞形态学变化
• 2.3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间成果
• 附录一 综述
• 附录二 中英文名词对照缩写
• 致谢
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• 学位论文版权使用授权书