本文主要研究内容
作者吴华健,毛天骄,杨龙斌,王玮,魏建忠,孙裴,李郁（2019）在《猪链球菌2型溶血素基因的表达及其免疫原性》一文中研究指出：【背景】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人兽共患病原菌,有35种血清型,其中以猪链球菌2型(SS2)危害最为严重。研究发现,各种血清型SS分泌的溶血素(Suilysin,SLY)可能具有较好的免疫保护作用,因此,SLY作为SS基因工程亚单位疫苗的成分具有较大优势。【目的】获得SS2安徽强毒株(AH10-8株)溶血素基因(sly)的表达产物,并对其免疫原性进行测定分析。【方法】根据GenBank数据库中登录号为DQ443533.1的全长sly序列,设计合成一对分别带有Bam HI、XhoI酶切位点的特异性引物,利用PCR从AH10-8株中扩增sly基因,构建pET-30a-sly原核表达重组质粒,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,进行IPTG诱导表达和His-Tag镍柱纯化蛋白,SDS-PAGE检测SLY,Western blotting鉴定SLY的反应原性;利用昆明鼠和斑马鱼进行SLY免疫攻毒保护试验,间接ELISA方法检测昆明鼠血清IgG抗体效价,观察比较病理组织变化及其免疫保护率。【结果】重组质粒pET-30a-sly在大肠杆菌中实现高效表达,获得大小为60kD的目的蛋白,与预期大小的SLY分子质量一致,能与SS2阳性血清发生特异性反应。SLY和AH10-8株灭活全菌体3次免疫昆明鼠后的血清IgG抗体效价分别为1:6 400、1:204 800 (以AH10-8株全菌体的超声裂解物为包被抗原)和1:102 400、1:51 200 (以SLY为包被抗原);SLY和AH10-8株灭活全菌体对昆明鼠和斑马鱼的免疫保护率分别为40%、80%和84%、92%;病理组织变化与攻毒对照组之间差异明显。【结论】成功表达的SLY具有良好的反应原性和免疫原性,可诱导机体产生保护性免疫反应,有望成为研制SS2新型疫苗的候选成分。
Abstract
【bei jing 】zhu lian qiu jun (Streptococcus suis,SS)shi yi chong chong yao de ren shou gong huan bing yuan jun ,you 35chong xie qing xing ,ji zhong yi zhu lian qiu jun 2xing (SS2)wei hai zui wei yan chong 。yan jiu fa xian ,ge chong xie qing xing SSfen bi de rong xie su (Suilysin,SLY)ke neng ju you jiao hao de mian yi bao hu zuo yong ,yin ci ,SLYzuo wei SSji yin gong cheng ya chan wei yi miao de cheng fen ju you jiao da you shi 。【mu de 】huo de SS2an hui jiang du zhu (AH10-8zhu )rong xie su ji yin (sly)de biao da chan wu ,bing dui ji mian yi yuan xing jin hang ce ding fen xi 。【fang fa 】gen ju GenBankshu ju ku zhong deng lu hao wei DQ443533.1de quan chang slyxu lie ,she ji ge cheng yi dui fen bie dai you Bam HI、XhoImei qie wei dian de te yi xing yin wu ,li yong PCRcong AH10-8zhu zhong kuo zeng slyji yin ,gou jian pET-30a-slyyuan he biao da chong zu zhi li ,jiang chong zu zhi li zhuai hua da chang gan jun BL21(DE3)zhong ,jin hang IPTGyou dao biao da he His-Tagnie zhu chun hua dan bai ,SDS-PAGEjian ce SLY,Western blottingjian ding SLYde fan ying yuan xing ;li yong kun ming shu he ban ma yu jin hang SLYmian yi gong du bao hu shi yan ,jian jie ELISAfang fa jian ce kun ming shu xie qing IgGkang ti xiao jia ,guan cha bi jiao bing li zu zhi bian hua ji ji mian yi bao hu lv 。【jie guo 】chong zu zhi li pET-30a-slyzai da chang gan jun zhong shi xian gao xiao biao da ,huo de da xiao wei 60kDde mu de dan bai ,yu yu ji da xiao de SLYfen zi zhi liang yi zhi ,neng yu SS2yang xing xie qing fa sheng te yi xing fan ying 。SLYhe AH10-8zhu mie huo quan jun ti 3ci mian yi kun ming shu hou de xie qing IgGkang ti xiao jia fen bie wei 1:6 400、1:204 800 (yi AH10-8zhu quan jun ti de chao sheng lie jie wu wei bao bei kang yuan )he 1:102 400、1:51 200 (yi SLYwei bao bei kang yuan );SLYhe AH10-8zhu mie huo quan jun ti dui kun ming shu he ban ma yu de mian yi bao hu lv fen bie wei 40%、80%he 84%、92%;bing li zu zhi bian hua yu gong du dui zhao zu zhi jian cha yi ming xian 。【jie lun 】cheng gong biao da de SLYju you liang hao de fan ying yuan xing he mian yi yuan xing ,ke you dao ji ti chan sheng bao hu xing mian yi fan ying ,you wang cheng wei yan zhi SS2xin xing yi miao de hou shua cheng fen 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自微生物学通报的吴华健,毛天骄,杨龙斌,王玮,魏建忠,孙裴,李郁，发表于刊物微生物学通报2019年03期论文，是一篇关于猪链球菌型论文,溶血素基因论文,原核表达论文,免疫原性论文,微生物学通报2019年03期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自微生物学通报2019年03期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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