（湘乡市疾病预防控制中心411100）
摘要：目的对于痰液中结核分枝杆菌采用荧光PCR技术进行检测的检测结果进行研究。方法将120例结核患者作为研究对象，分别进行荧光PCR技术检测和痰涂片检查，分析荧光PCR技术检出的阳性率，然后分别进行荧光PCR技术和固体培养检查，以固体培养检查为金标准，检验荧光PCR技术的敏感度和特异度。结果在进行荧光PCR技术和痰涂片培养检查中，荧光PCR技术检出的阳性率为51.67%明显高于痰涂片培养检查35.83%，组间数据对比差异显著P<0.05。在和固体检查培养中比较，荧光PCR技术敏感性和特异性分别为93.33%和95%。结论荧光PCR技术在结核分枝杆菌的诊断中具有较高的敏感性和特异性，且诊断阳性率较高，效果明显，值得临床推广。
关键词：荧光PCR技术；结核分枝杆菌；痰液
结核分枝杆菌是引起肺结核的病菌，对痰液中的结核分枝杆菌进行检测有利于发现传染源、确定治疗方案，尽早进行隔离，预防广泛传播。目前痰结核分枝杆菌的检查有涂片染色法和固体培养法。涂片染色法检测较为迅速且成本低，但其敏感性低，固体培养法灵敏度和特异度均较高，但用时长。因此选择合适的方法进行检测，有利于疾病的治疗。本文选取120例结核患者作为研究对象，分别实施不同的检测，分析其检测结果，研究内容如下。
1资料与方法
1.1基础资料
选取120例结核患者作为研究对象，本次研究对象的选取时间段为2016年5月-2017年3月，男女比例为80：40，年龄36～78岁，平均年龄（54.5±3.5）岁，病程1～5年，平均病程（2.5±0.5）年，全部采用痰标本进行检测。嘱咐患者清晨漱口，然后从深部咳痰2-3口，在无菌塑料杯中送检。
1.2方法
1.2.1仪器与试剂
检验采用由上海力申科学仪器有限公司生产的生物安全柜HFsafe－1200TE；用由上海一恒仪器有限公司生产的GHP－9080的37℃孵育箱，使用由天津仪美科技有限公司生产的Cepheid的Gene－Xpert检测仪及配套试剂（批号：14034364）[1]。采用改良罗氏培养基（批号：LJ140502），按照国家标准方法配置的抗酸染色试剂，所有操作均按照痰结核检测的相关标准进行检测。
1.2.2涂片染色法
进行固体培养：取2ml痰标本至带螺旋盖的前处理管中，根据样本的性状加入4%氢氧化钠，约加入1倍～2倍体积氢氧化钠前处理液，放置在涡旋振荡器上进行振荡，时间约30s～60s，直至标本与处理液充分混匀，然后在室温下放置15min，前处理完成后用无菌吸管吸取0.1ml的前处理液，在2支酸性罗氏培养基斜面上进行均匀接种，保持斜面水平向上，以37℃进行培养，24h后直立放置继续培养，温度不变[2]。接种后第3d、7d对培养情况进行观察，此后每周观察一次，将生长结果进行记录。
1.2.3荧光PCR技术检测
在生物安全柜内选取痰标本1ml于处理管中，然后加入处理液进行漩涡振荡，处理液约为痰标本的2倍体积，振荡约20次，室温静置15min后取2ml混合液加入到反应盒中，将反应盒放进Gene－Xpert检测仪进行检测，在2h后对结果进行记录[3]。
1.3观察指标
分析检验荧光PCR技术的敏感度、特异度和阳性率。
1.4统计学方法
文中数据结果采用统计学软件SPSS19.0版本计算，正态分布的计量资料以表示，采用t值检验，正态分布的计数资料以“%”百分比表示，用值检验，计算后若观察数据存在较为明显的差异，则采用P<0.05表示，具有统计学意义。
2结果
2.1分析荧光PCR技术与涂片染色法结果
经检测发现，用荧光PCR技术与涂片染色法对120例患者的痰标本进行检测，荧光PCR技术阳性患者62例，其阳性检出率为51.67%，涂片染色法阳性患者43例，阳性检出率为35.83%，两种检测方法的阳性检出率差异明显P<0.05，如表1所示。
3讨论
结核分枝杆菌是呼吸道常见的一种致病菌，它可以引起肺结核，对患者的身体健康存在较大的威胁。而机体受到结核分枝杆菌感染后并不一定就会发病，当人体的免疫力低下时才会发病，病菌才会活跃，携带者就会出现肺结核的早期症状。据WHO统计表明，全世界的结核病患者每年都会有800-1000万[5]。肺结核往往不容易治疗，且会反复发作，患者以咳嗽、咳痰、喘息为主要表现，若不能及时治疗则容易引起更多的并发症。结核分枝杆菌则是感染肺结核的主要病菌，通过飞沫传播，痰液中的结核分枝杆菌进入空气中也会造成传播，因此对于痰液结核菌检查是非常重要的。
荧光PCR技术是临床上常用的病菌检查方法，通过痰液进行结核分枝杆菌的检查，了解痰液中结核分枝杆菌的含量，从而进行提早预防和治疗，也有助于患者疾病的确诊。荧光PCR技术叫做体外基因扩增技术，是分子生物领域的重要研究成果，它具有较好的诊断价值，因此被广泛应用于临床[6]。PCR在临床上主要被用于对特定DNA的诊断，尤其是对病原体鉴定、免疫学研究、遗传病研究等领域有着重要的贡献。本文对痰标本中的结核分枝杆菌检查采用荧光PCR技术、涂片染色法和固体培养法进行检测，结果荧光PCR技术的阳性率明显较涂片染色法的阳性率高，与固体培养法相比其特异度和敏感性均较好，因此荧光PCR技术对于痰液中结核分枝杆菌的检测具有较好的效果。
综上所述，在痰液中结核分枝杆菌的检测用荧光PCR技术可以进行准确地诊断，敏感性、特异性均较好，应用前景较广。
参考文献
[1]李良杰，林小玲.荧光PCR技术检测痰液中结核分枝杆菌的研究[J].中国卫生检验杂志，2015，25（21）：3636-3637.
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[3]王旭洲，谢飞来，郑智勇.荧光定量PCR检测结核/非结核分枝杆菌在肉芽肿病理诊断中的应用[J].临床与实验病理学杂志，2013，29（08）：884-887+891.
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[6]肖慧霞，王晓平，王福锐，等.荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用[J].宁夏医学杂志，2011，33（02）：173-174.