猪脂肪细胞生物学特性及胰岛素和胆固醇在其生脂过程中的调控作用

论文摘要

肥胖已成为威胁人类健康的流行病,应用啮齿类为实验动物、围绕肥胖的发生、发展及其相关疾病的研究一直是人类医学研究的一个热点。猪作为生脂能力最强的动物,不仅解剖及生理学特点与人相似,其生脂的许多方面与啮齿类动物不同而与人有着诸多相似之处。目前,猪作为研究肥胖及相关疾病的动物模型已日益引起医学工作者的关注。另一方面,人类肥胖问题对畜牧业提出了更高的要求,培育低脂高瘦肉率的畜禽已经成为畜牧业发展的主攻方向。基于以上原因,以猪为实验动物研究脂肪生成及调控具有特殊意义。体脂沉积是脂肪细胞增殖、分化及肥大共同作用的结果,固醇调控元件结合蛋白-1c（sterol regulatory element binding protein,SREBP-1c）与其它转录因子组成网络共同调控这一过程。脂肪细胞原代培养体系为研究脂肪细胞分化及调控提供了一个可操作模型。迄今为止,国内尚未建立成熟的猪脂肪细胞培养体系。本实验以猪脂肪细胞为细胞模型,对原代猪前体脂肪细胞的培养方法、培养体系及其生物学特性进行研究,并就猪前体脂肪细胞在冷冻过程中所应用的保护剂及其浓度进行探索,在此基础上为探讨脂肪形成过程中的细胞事件及SREBP-1c在此过程中的作用,以调控SREBP-1c表达的因子-胰岛素及胆固醇为诱因,研究了猪脂肪细胞增殖、分化及肥大过程中细胞数目、形态、生脂酶活性、甘油三酯（ triglyceride,TG）沉积量的变化,进一步以相对定量RT-PCR方法分析了转录因子SREBP-1c及其下游基因乙酰辅酶A羧化酶（acetyl-CoA carboxylase,ACC）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）、硬脂酰辅酶A去饱和酶（stearoyl-CoA desturase SCD）mRNA的表达水平,获得如下结论:1.建立了猪前体脂肪细胞培养的优化体系,并对其生物学特性进行测定。胶原酶消化法与组织块贴壁法均可培养出猪前体脂肪细胞;组织块法培养的原代细胞中分化为成熟的细胞较少,分化阶段不一致;消化法可获得大量纯度均一、增殖和分化旺盛的前体脂肪细胞。在用消化法培养的过程中,200目筛网孔径,800 g离心力离心5 min比150、600目筛网孔径80、300 g离心力离心10 min更为合适。结果提示:猪脂肪细胞原代培养宜用胶原酶消化法,其适宜的筛网孔径为200目,离心力为800 g,离心时间为5 min。此方法获得的猪脂肪细胞生物学特性为:前体脂肪细胞的增殖主要在细胞培养的26天,其分化出现在培养的第3天,在细胞培养后期尤为明显,在第10天基本完成终末分化,表现为细胞体积增大,GPDH酶活性增加,细胞形态从扁平宽梭形或不

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 文献综述
• 第一章 脂肪细胞分化
• 1.1 研究脂肪细胞分化的重要意义
• 1.2 脂肪细胞离体培养模型
• 1.3 脂肪细胞分化阶段及特异性分子标志
• 1.4 脂肪细胞分化过程中形态学变化
• 1.5 关于脂肪细胞分化的2 个新观点
• 1.6 关于脂肪细胞分化的核转录因子调控
• 第二章 SREBPS 生物学功能及其与疾病的关系
• 2.1 SREBPS 的发现和命名及其前体蛋白的结构
• 2.2 SREBPS 的定位及在不同组织间的分布
• 2.3 SREBPS 的基因表达调控
• 2.4 SREBPS 调控体脂平衡
• 2.5 SREBPS 与疾病
• 第二部分 实验研究
• 前言
• 第三章 猪前体脂肪细胞体外培养方法的优化及生物学特性研究
• 3.1 材料和方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 第四章 不同冷冻保护剂及保护剂浓度对猪前体脂肪细胞活力及分化能力的影响
• 4.1 材料与方法
• 4.2 结果
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 第五章 胰岛素对猪脂肪细胞生脂的调控
• 5.1 材料与方法
• 5.2 结果
• 5.3 讨论
• 5.4 小结
• 第六章 胆固醇对猪脂肪细胞生脂的调控
• 6.1 材料与方法
• 6.2 结果
• 6.3 讨论
• 6.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介