唑来膦酸与紫杉醇协同抑制恶性肿瘤细胞增殖及诱导凋亡的分子机制研究

论文摘要

在前期工作中,我们以人乳腺癌细胞系MCF-7及人肺腺癌细胞系A-549为研究对象,将两个细胞系各分为10组（接受不同浓度的单药唑来膦酸（zoledronic acid, ZOL）处理）和5组（接受不同浓度的单药紫杉醇（paclitaxel, PTX）处理），MTT显示：单药ZOL及单药PTX对两个细胞系均有抑制作用；且抑制作用具有浓度依赖性；结合国内外文献和我们的研究结果,得到ZOL与PTX的最适用药浓度分别为100uM和2nM,将最适浓度的ZOL与PTX联合处理两个细胞系,并按给药顺序分为先ZOL后PTX（ZOL→PTX）、先PTX后ZOL（PTX→ZOL）及同时给药（PTX+ZOL）三个组及空白对照组。应用MTT法检测各组细胞抑制率、流式细胞仪检测各组细胞凋亡率及各组细胞周期变化,通过比较分析各组实验结果得出：ZOL与PTX联合应用时具有协同抑制乳腺癌和肺腺癌细胞系的作用,该作用具有给药顺序依赖性,抑制率最大的给药组为PTX→ZOL组；在细胞周期上,PTX→ZOL组能诱导S期细胞聚集从而将细胞周期阻滞在S期而不能进入G2/M期进行细胞增殖分裂。目的：本实验通过观察联合应用ZOL及PTX对人乳腺癌细胞系MCF-7及肺腺癌细胞系A-549的抑制作用,检测与ZOL和PTX抗肿瘤作用相关的Raf/Mek/Erk和PI3K/Akt信号传导通路的指标变化,进一步探讨两药协同作用的分子机制。方法：以人乳腺癌细胞系MCF-7及人肺腺癌细胞系A-549为研究对象,将两个细胞系各分为4组：①空白对照；②单药ZOL作用24小时（Hour, H）;⑧单药PTX作用4H；④先PTX作用4H后ZOL作用24H（PTX→ZOL）。应用Realtime-PCR检测各组Erk和Akt的mRNA水平的变化情况,应用Western blot检测各组Erk、Akt蛋白表达及磷酸化水平和抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达。结果：1、24孔培养板中,MCF-7和A-549细胞的最适细胞密度均为4×104个/ml；6孔培养板中：MCF-7的最适细胞密度为2×105个/ml,A-549的最适细胞密度为3×105个/ml。2、在种植密度相同的情况下,MCF-7细胞较A-549细胞增长快,两者均呈现S形生长曲线。孵育2天后,两个细胞系均可进入对数生长期,选择此时进行加药实验。3、Realtime-PCR检测结果显示,MCF-7和A-549细胞中Erk和Akt的mRNA表达均为：空白对照组最高,单药ZOL组次之,再次为PTX组,PTX→ZOL组最低。4、Western blot检测结果显示：两个细胞系各组中Erk、Akt蛋白表达水平均无差异,但Akt和Erk磷酸化水平为：空白对照组最高,单药ZOL组次之,再次为PTX组,PTX→ZOL组最低。Bcl-2蛋白表达水平亦是：空白对照组最高,单药ZOL组次之,再次为PTX组,PTX→ZOL组最低。结论：唑来膦酸联合紫杉醇可能通过下调Raf/Mek/Erk中Erk基因mRNA的表达,降低Erk磷酸化水平,抑制Erk激酶的活性,进而抑制乳腺癌细胞系MCF-7和肺腺癌细胞系A549的生长和增殖,并可能通过下调PI3K/Akt信号通路中Akt基因mRNA的表达,降低Akt磷酸化水平,进而减弱Akt活性,进一步降低抗凋亡蛋白Bcl-2的水平,起到促凋亡作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语/符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述 双膦酸盐在抑制骨吸收和抗肿瘤方面的研究进展
• 综述参考文献
• 致谢