论文摘要
目的观察细胞因子体外培养扩增CD4+CD25+调节性T细胞（regulatory T cell, Treg）的作用,以便体外获取大量Treg细胞。方法将从C57BL/6幼稚（na?ve）小鼠脾脏和淋巴结中提取的Treg以羟基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein succinimidylester,CFSE）标记,并与从DBA/2小鼠骨髓中提取的成熟树突细胞（mature dendritic cell, mDC）混合培养于96孔圆底培养板中（Treg 1×105/孔,mDC 2.5×104/孔）。实验共分为4组:对照组不加入任何细胞因子,白细胞介素-2（IL-2）组每孔加入IL-2（20ng/ml）,白细胞介素-4（IL-4）组每孔加入IL-4（20ng/ml）,白细胞介素-15（IL-15）组每孔加入IL-15（150ng/ml）。6天后通过流式细胞仪检测Treg增殖和凋亡的情况。分别将培养获得的Treg与经CFSE标记的C57BL/6幼稚小鼠效应性T细胞（effector T cell, Teff）混合培养,6天后以流式细胞仪测定扩增后的Treg对Teff的抑制活性。通过流式细胞仪检测扩增后Treg的Foxp3表达,从而证明培养获得的Treg仍保持其表型。结果在保持其对Teff抑制活性的同时,IL-2组、IL-4组、IL-15组Treg的增殖细胞前体频率（precursor frequency PF,代表发生分裂增殖的细胞占原代细胞的百分比）分别为31.3%、28.9%、34.5%,明显高于对照组（14.5%）,P<0.05;增殖指数（proliferation index PI,代表增殖后细胞总数与原代细胞总数的比值）分别为1.9、1.7、1.8,明显高于对照组（1.5）,P<0.05。IL-2组、IL-4组、IL-15组Treg的凋亡细胞比例分别为12.8%、11%、12.7%,明显低于对照组（28.9%）,P<0.05。扩增后的Treg仍高表达Foxp3（91.75%）。结论IL-4、IL-15和IL-2一样,具有促进Treg增殖、减少其凋亡的作用,并同时保持对Teff的抑制功能。扩增后的Treg仍保持其表型,高表达Foxp3。
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