论文摘要
本研究以白英药材为研究对象，对其总皂苷、总黄酮、总生物碱、薯蓣皂苷元、6种酚类化合物进行了定量分析，对其指纹图谱进行了初步研究，并研究了其体外抗肿瘤活性。具体内容如下：1．建立了白英总皂苷的含量测定方法：采用正交试验设计方法，以总皂苷含量为评价指标，对盐酸浓度(mol·L-1)、乙醇体积分数（％）、水解时间（h）3个因素进行优化，确定了白英中总皂苷的最佳提取工艺；用高氯酸显色，以薯蓣皂苷元为对照，UV-Vis法测定了19批白英中总皂苷的含量。薯蓣皂苷元在8．91～29．70μg·mL-1范围内线性关系良好，平均回收率为95．9％（RSD=1．5％）。2．建立了白英总黄酮的含量测定方法：采用正交试验设计方法，以总黄酮含量为评价指标，对乙醇体积分数（％）、提取次数和提取时间（h）3个因素进行优化，确定了白英中总黄酮的最佳提取工艺；用三氯化铝显色，以芦丁为对照，UV-Vis法测定了21批白英中总黄酮的含量。芦丁在5．48～21．92μg·mL-1范围内线性关系良好，方法的平均回收率为96．7％（RSD=1．1％）。3．建立了白英总生物碱的含量测定方法：采用正交试验设计方法，以总生物碱含量为评价指标，对乙醇体积分数（％）、提取次数和乙醇体积（mL）3个因素进行优化，确定了白英中总生物碱的最佳提取工艺；用酸性染料比色法测定白英中总生物碱的含量，以士的宁为对照，0．001mol·L-1的溴麝香草酚蓝为酸性染料，在pH4．0缓冲液中用三氯甲烷萃取，再用0．01mol·L-1KOH的乙醇液碱化，在600nm处测定溶液的吸光度值。测定了21批白英中总生物碱的含量。士的宁在10．20～35．70μg·mL-1范围内线性关系良好，方法的平均回收率为99．3％（RSD=1．3％）。4．建立了白英薯蓣皂苷元的含量测定方法：采用正交试验设计方法，以薯蓣皂苷元含量为评价指标，对乙醇体积（mL）、硫酸浓度(mol·L-1)、水解时间（h）3个因素进行优化，确定了白英中薯蓣皂苷元的最佳提取工艺；采用HPLC-UV测定了20批白英中薯蓣皂苷元的含量。选用Hypersil ODS2（4．6mm×200mm，5μm）色谱柱；流动相：乙腈-水（80：20，V/V）；流速：1．0mL·min-1；检测波长：210nm；柱温：40℃。薯蓣皂苷元在20．1～402μg·mL-1。范围内线性关系良好，平均回收率为96．7％（RSD=1．6％）。5．建立了同时测定白英中6种酚类化合物的含量测定方法：采用正交试验设计方法，以原儿茶酸、绿原酸、香草酸、咖啡酸、阿魏酸和芦丁6种组分的含量为评价指标，对乙醇体积分数（%）、提取次数、乙醇体积（mL）3个因素进行优化，确定了白英中上述6种组分的最佳提取工艺；采用HPLC-UV同时测定了21批白英中上述6种组分的含量。选用Diamonsil C18（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱；流动相：A（0．3％HCOOH水溶液）与B[甲醇-乙腈（4：1，V／V）]梯度洗脱；流速：0．8mL·min-1；检测波长：254nm；柱温：20℃。原儿茶酸、绿原酸、香草酸、咖啡酸、阿魏酸和芦丁的线性范围分别为0．14～6．30μg·mL-1、8．80～396μg·mL-1、0．78～35．28μg·mL-1、0．42～19．08μg·mL-1、0．43～19．44μg·mL-1和3．20～144μg·mL-1，方法的平均回收率分别为98．2％（RSD=1．4％）、100．1％（RSD=1．5％）、97．8％（RSD=1．1％）、98．2％（RSD=0．6％）、99．7％（RSD=0．8％）和99．1％（RSD=0．6％）。6．建立了白英HPLC指纹图谱：采用RP-HPLC法，选用Kromasil C18（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱；流动相：A（0．2％HCOOH水溶液）与B（乙腈）梯度洗脱；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：270nm；柱温：25℃。建立了白英的HPLC指纹图谱。用SPSS13．0软件对21批药材指纹图谱进行系统聚类分析，根据聚类分析结果将白英分为4类，结合聚类分析结果和药材主产地，选定其中12批样品建立共有模式。并应用“中药指纹图谱相似度评价系统”对各产地药材进行了质量评价。7．研究了白英乙醇提取物的抗肿瘤活性：采用MTT法，选取体外培养的人宫颈癌Hela细胞为模型，以半数抑制浓度(IC50)为指标，考察了18批白英对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用。结果表明，不同来源的白英出膏率、体外增殖抑制效果有差异，白英药材出膏率的高低与其体外增殖抑制效果好坏无必然联系。
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