辛伐他汀对大鼠肾缺血再灌注损伤的作用及其机制研究

论文摘要

肾缺血再灌注损伤（renal ischemia/ reperfusion injury , RI/ RI）是临床上常见病理生理现象,在缺血性急性肾损伤的病理过程中起重要作用,是多因素参与的复杂的病理过程。其中主要的损伤因素有自由基损伤、白细胞-内皮细胞相互作用、胞内钙超载、NO等舒血管物质减少、内皮素等缩血管物质产生过多等。他汀类药物是三羟基三甲基戊二酰辅酶A （HMG-COA）还原酶抑制剂,通过对该酶特异性抑制作用,使HMG-CoA不能转变为甲羟戊酸（Mevalonate,MVA）,从而阻断胆固醇的合成,降低血胆固醇的水平,这一作用已普遍用于临床治疗高脂血症。他汀类药物作用的多效性除降脂作用外,近年研究还发现,其对肾脏也有一定的保护功能。辛伐他汀及洛伐他汀可通过诱导培养人内皮细胞eNOS基因的转录激活,促进一氧化氮（NO）合成,而NO可扩张肾小球入球和出球动脉,降低肾脏血管阻力,使肾脏血浆流量和肾小球滤过率增加。此外也有报道,他汀类药物可减少烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate, NADPH）氧化酶亚基表达,增加抗氧化酶活性,发挥其细胞内抗氧化作用,从而减少氧自由基产生或直接清除机体产生的氧自由基,增强机体的抗氧化能力。但他汀化学等方法观察辛伐他汀对RI/RI的作用,并探讨其可能的作用机制。类药物是否对缺血再灌注损伤肾脏有保护作用,目前少有报道。因此探讨他汀类药物对缺血再灌注损伤大鼠肾脏的保护作用及其作用机制,对RI/ RI的防治具有十分重要的意义。本实验旨在应用生理、生化、分子生物学及免疫组织目的:观察辛伐他汀对RI/RI的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:采用夹闭双侧肾动、静脉45分钟后松夹再灌的方法制作RI/RI模型,观察辛伐他汀对大鼠RI/RI损伤的影响。成年健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠60只,体重150～180g,在18-22℃实验室安静饲养两日后动物随机分为5组,即:（1）假手术组（Sham） （2）缺血再灌注组（I/R） （3）缺血再灌注+辛伐他汀低剂量组5mg/kg/d（Sim-L） （4）缺血再灌注+辛伐他汀中剂量组20mg/kg/d（Sim-M） （5）缺血再灌注+辛伐他汀高剂量组40mg/kg/d（Sim-H）动物分组后,Sim-L组每日给予辛伐他汀5mg/kg灌胃,Sim-M组每日20mg/kg灌胃,Sim-H组每日40 mg/kg灌胃,持续2周。假手术组和缺血再灌组每日予等量生理盐水灌胃。2周后复制动物模型。动物经1%戊巴比妥钠腹腔麻醉,开腹,暴露双侧肾动、静脉。除假手术组只开腹不夹闭肾动、静脉外,其余各组均夹闭双侧肾动、静脉45分钟,然后去夹再灌。再灌后逐层缝合腹膜,腹壁肌肉和皮肤。分别于再灌后6小时和24小时分批取血及双侧肾脏测定血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、肾组织丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）的含量及超氧化物歧化酶（SOD）的活性。免疫组化法观察肾组织内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、P47phox的表达。Western blot法检测肾组织eNOS和P47phox蛋白表达水平。结果:1.大鼠肾脏缺血再灌注损伤后,光镜所见:Sham组肾组织无明显异常;I/R组肾组织损伤随缺血再灌时间延长逐渐加重,表现为肾小管上皮细胞混浊肿胀、坏死、管腔明显扩张,管内可见管型和脱落细胞、间质水肿、核染色质边集以及明显的胞浆空泡样变性。Sim-M和Sim-H组各时点肾组织损伤程度较I/R组明显减轻,Sim-L组各时点肾组织损伤程度与I/R组相似。2.大鼠肾脏缺血再灌注损伤后,I/R组肾功能明显下降,BUN、Scr均明显高于Sham组（P<0.01）,且随缺血时间延长呈加重趋势;与I/R组相比,Sim-L、Sim-M和Sim-H组各时点BUN、Scr均显著降低（P<0.05～0.01）。3.大鼠肾脏缺血再灌注损伤后,I/R组各时点SOD活力较Sham组显著降低（P<0.01）,MDA含量显著升高（P<0.01）;与I/R组相比,Sim-M组和Sim-H组各时点SOD活力均明显增加（P<0.01）, MDA含量均显著下降（P<0.01）,Sim-L组的各项指标与I/R组相比没有明显的变化。4.大鼠肾脏缺血再灌注损伤后,I/R组各时点NO及iNOS含量均明显高于Sham组（P<0.01）;与I/R组相比,Sim-M组和Sim-H组各时点NO含量显著增加（P<0.01）,Sim-M组和Sim-H组iNOS含量降低（P<0.01）;Sham组肾皮质eNOS无明显表达,I/R组肾皮质eNOS表达均较Sham组增加,与I/R组相比,Sim-M组和Sim-H组各时点eNOS表达显著增加; Western blot法检测肾组织eNOS蛋白含量,I/R组肾皮质eNOS蛋白含量较Sham组增加,与I/R组相比,Sim-M组和Sim-H组各时点eNOS蛋白含量均明显增加,Sim-L组与I/R组相比没有明显的变化。5.大鼠肾脏缺血再灌注损伤后,肾皮质P47phox表达较Sham组明显增加,Western blot法检测肾组织P47phox蛋白含量, I/R组肾皮质P47phox蛋白含量较Sham组明显增加;与I/R组相比,Sim-M组和Sim-H组各时点P47phox表达及蛋白含量均明显降低。Sim-L组与I/R组相比无明显变化。结论:1. RI/RI后,肾功能明显受损。肾小管上皮细胞肿胀、坏死、间质水肿。RI/RI大鼠BUN、Scr、MDA和iNOS含量均较sham组明显增加,SOD活力及eNOS表达均较sham组明显降低,肾皮质P47phox免疫反应阳性颗粒和蛋白表达均明显增加。表明P47Phox参与了肾缺血/再灌注损伤,并在其中发挥了重要作用。2.辛伐他汀可显著降低RI/RI大鼠BUN、Scr和MDA含量,提高肾组织SOD活力。降低肾组织中iNOS含量,增加eNOS免疫反应阳性颗粒和蛋白的表达,增加NO含量。表明辛伐他汀可减轻RI/RI大鼠肾组织损伤,改善肾功能。3.辛伐他汀能明显减少缺血再灌损伤大鼠肾皮质P47phox免疫反应阳性颗粒和蛋白的表达,减轻肾缺血再灌注损伤。表明辛伐他汀减轻RI/RI大鼠肾组织损伤的机制可能与其降低p47phox的表达水平、干扰NAD（P）H氧化酶生成通路的某些环节、抗自由基损伤有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写
• 研究论文 辛伐他汀对大鼠肾缺血再灌注损伤的作用及其机制研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 参考文献
• 综述 辛伐他汀对肾保护作用的研究进展
• 致谢
• 个人简历