地耳草的品质评价研究

论文摘要

本文以地耳草为研究对象,对地耳草的有效成分及有害物质进行了含量分析,对地耳草的指纹图谱进行了研究,并对不同生长期地耳草有效物质的动态积累和变化规律进行了研究,为地耳草药材的质量评价及其质量标准制订提供了可靠依据。主要研究内容与结果如下：1.地耳草商品药材的鉴定研究。用传统鉴定方法及现代鉴定技术,从药材性状、显微特征、薄层色谱及HPLC指纹图谱等方面,建立地耳草及其易混品细叶金丝桃的鉴定方法；以有效成分定量分析结合指纹图谱整体分析的模式,评价商品地耳草的品质。2.UV-VIS法测定地耳草总黄酮的含量。选取槲皮素作对照品,以测定的槲皮素含量来作为地耳草中总黄酮含量的计算指标,测定值与真实值有一定差异,本实验旨在对不同产地地耳草中总黄酮的含量作量化比较,评价药材质量。3.HPLC法测定六种黄酮类单体的含量。供试品制备用80%甲醇50mL,根据本实验供试品制备的优化结果,认为回流提取90min×3所得6种黄酮的总量最高。选取地耳草已知明确的六种黄酮类单体（芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素、山柰酚）作对照品,采用HPLC法同时测定六种黄酮类单体的含量。此测定方法,准确可靠,灵敏度高,重现性良好,为地耳草质量标准评价研究提供了科学依据。4.建立高效毛细管电泳二极管阵列检测法（HPCE-DAD）同时测定地耳草中芦丁、异槲皮苷、金丝桃苷、金丝桃苷、槲皮苷、山奈酚及槲皮素含量的方法。选择毛细管区带电泳分离模式,以40 mmol·L-1硼砂缓冲液（pH8.62）为电泳介质,未涂渍标准熔融石英毛细管（75μmi.d.×64.5 cm,有效长度56 cm）为分离通道,,分离电压为25 kV,检测波长为206nm,毛细管温度为25℃,压力进样为50 mbar,8 s。6种黄酮的峰面积与浓度的线性关系良好（r>0.9953）；加样回收率为98.8～102.9%。该方法简单、准确,重现性较好,可用于地耳草药材质量的评价和控制。5.电感耦合等离子发射光谱法（ICP）和微波消解—原子荧光光谱法测定21种无机元素的含量（16种微量元素和5种重金属元素）。并用SPSS16.0对数据进行分析处理,获得了地耳草无机元素含量的准确信息,可为地耳草微量元素的药效药理研究提供科学依据,同时还将不同产地的微量元素制成元素分布图谱,可以进行地耳草的真伪鉴别。6.建立了地耳草高效液相色谱指纹图谱质控方法,可为地耳草样品的质量和品种鉴定提供全面的信息和检测标准。不同产地及不同采收期地耳草样品的HPLC指纹图谱结果表明,产地不同,地耳草样品之间的相似度有一定的差异,这可能与地耳草生长的不同地理条件,不同气候以及不同的品种有关,同一产地的地耳草样品的高效液相指纹图谱有较好的相似度,实现对地耳草药材质量的整体评价。7.建立了地耳草毛细管电泳指纹图谱质控方法,可为地耳草样品的质量和品种鉴定提供全面的信息和检测标准,实现对地耳草药材质量的整体评价。8. HSGC-MS联用技术对不同产地地耳草进行分析,测定其总离子流指纹图谱,确定共有峰,并对部分色谱峰进行了初步归属,初步建立了以12个共有峰为特征指纹信息的HSGC-MS （?）旨纹图谱,发现地耳草样品之间的相似度有一定的差异。该方法准确可靠,重现性好,可作为地耳草内在质量评价的依据。9. UPLC-MS联用技术对不同产地地耳草进行分析,测定其总离子流图谱,并对部分色谱峰进行了初步归属,通过与对照品及相关质谱数据比较分析,初步鉴定其中8种黄酮类化合物,并用UPLC-DAD法对6种黄酮类化合物的含量同时测定。该方法准确可靠,重现性好,可作为地耳草内在质量评价的依据。10.不同采收期地耳草有效物质的动态积累及变化规律研究。用现代分析技术,以有效成分定量分析结合指纹图谱整体评价的模式,对不同生长时间地耳草中黄酮类成分、挥发性成分、无机元素等有效物质的动态积累及变化规律进行分析研究,为确定药材的适宜采收期提供科学依据。11.气候因子对药材有效物质合成和积累的影响研究。考察气候因子（气温、光照时数、降水量、相对湿度等）,以药材中有效物质黄酮类成分（总黄酮和芦丁、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素及山柰酚等）、挥发性成分、无机元素的累积量为考核指标,采用UV和HPLC、HPCE等对不同气候因子作用下药材有效物质的变化及其规律进行研究,用逐步回归法分析了气候因子对有效物质积累的影响,探讨气候因子与有效物质积累的相关性。论文主要创新点：1、探究不同物候期地耳草有效物质的动态积累及变化规律,为确定地耳草的最佳采收期提供依据；分析气候因子与有效物质积累的相关性,揭示影响有效物质含量主导因子,为优质药材的生产提供理论指导。2、以多种有效成分同时定量分析结合指纹图谱整体评价的模式,建立地耳草品质和安全性的科学评价体系。3、首次建立地耳草中芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素及山柰酚6种活性成分同时测定的HPLC-DAD、HPCE-DAD分析方法。4、首次建立不同产地、不同采收期和不同种属地耳草的HPCE-DAD、HSGC-MS指纹图谱分析方法。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 绪论
• 1. 品种考证
• 2. 原植物形态特征及分布
• 3. 化学成分研究
• 4. 药理作用
• 5. 质量评价
• 6. 临床应用
• 第二章 地耳草商品药材的鉴定研究
• 1 仪器与试药
• 2 方法与结果
• 3 小结与讨论
• 第三章 不同产地地耳草药材的质量评价研究
• 一、地耳草药材中有效物质的含量分析
• （一） 地耳草总黄酮的含量测定
• （二） 地耳草六种黄酮类成分HPLC法同时测定
• （三） 地耳草六种黄酮类成分HP CE法同时测定
• （四） 地耳草黄酮类成分UPLC-M S分析
• （五） 地耳草挥发性成分的HSGC-MS分析
• （六） 地耳草中无机元素分析
• 三、地耳草药材的指纹图谱评价
• （一） 地耳草HPLC指纹图谱分析
• （二） 地耳草HSGC-MS指纹图谱分析
• （三） 地耳草HPCE指纹图谱分析
• 第四章 不同生长期地耳草有效物质的动态积累及变化规律研究
• 一、地耳草黄酮类成分分析及其动态变化
• 二、地耳草挥发性成分分析及其动态变化
• 三、地耳草无机元素的动态变化分析
• 四、不同生长期地耳草的指纹图谱分析
• （一） 地耳草HPLC指纹图谱分析
• （二） 地耳草HSGC-MS指纹图谱分析
• （三） 地耳草HPCE指纹图谱分析
• 第五章 气候因子对药材有效物质合成和积累的影响研究
• 一、地耳草黄酮类成分与气候因子的关系
• 二、地耳草挥发性成分与气候因子的关系
• 三、地耳草无机元素与气候因子的关系
• 小结
• 参考文献
• 硕士期间发表论文
• 致谢