红景天对乳腺癌的作用及其调节机制

论文摘要

在急性心肌梗死的动物模型中，红景天（Rhodiola L）可通过诱导血管新生相关因子VEGF、bFGF和Ⅷ因子的表达，增加新生血管密度，改善心肌缺血。另一方面，红景天在体外可抑制白血病、肝癌等肿瘤细胞的生长增殖。但是红景天对于肿瘤新生血管的影响目前尚无报道。本课题首次研究红景天对乳腺癌细胞株及其裸鼠乳腺癌移植瘤的作用，包括肿瘤的增殖、分化、浸润转移以及血管新生，推测可能的作用机制，为红景天治疗缺血性心脏病的同时对合并恶性肿瘤是否产生影响及其机制做有益的探索。第一部分红景天对乳腺癌MDA-MB-435细胞的作用及其机制目的研究红景天对乳腺癌细胞增殖及其血管新生相关因子表达的影响。方法采用不同浓度红景天提取物处理乳腺癌MDA-MB-435细胞，观察药物干预后MDA-MB-435细胞的形态学变化；通过制作细胞增殖曲线，了解药物对肿瘤细胞增殖活性的影响；应用流式细胞仪检测红景天提取物对乳腺癌MDA-MB-435细胞周期的阻滞作用；运用PCR方法测定红景天提取物对乳腺癌MDA-MB-435细胞表达血管新生相关因子VEGF、趋化因子受体DARC的影响。结果（1）红景天提取物治疗24小时后，MDA-MB-435细胞株的形态学特征发生显著变化，且随着药物浓度增加而愈加明显。（2）红景天提取物具有阻滞MDA-MB-435细胞增殖周期的作用，主要阻滞于S期，该作用随着药物浓度增加亦增强。（3）红景天提取物可显著抑制MDA-MB-435细胞的增殖活性，该抑制作用随着作用时间的延长、药物浓度的增高更为明显。（4）红景天提取物处理MDA-MB-435乳腺癌细胞24小时，各剂量组肿瘤细胞表达VEGF mRNA无明显差异；在治疗44小时后，红景天提取物较对照组显示出明显地抑制MDA-MB-435细胞表达VEGF的作用，且不同药物浓度的作用强度相似。（5）红景天提取物作用24小时，MDA-MB-435乳腺癌细胞内DARCmRNA的表达明显增高，不同药物浓度升高DARC表达的强度亦相似。第二部分红景天对裸鼠乳腺癌MDA-MB-435细胞移植瘤的作用及其机制目的观察红景天对乳腺癌移植瘤的影响，探索红景天在体内对恶性肿瘤的作用及其可能机制。方法建立裸鼠乳腺癌MDA-MB-435细胞移植瘤模型，随机分为红景天提取物治疗组与生理盐水对照组，治疗4周。比较两组裸鼠移植瘤的体积；应用免疫组织化学染色方法，研究红景天提取物对裸鼠移植瘤的增殖活性、浸润转移相关酶表达、血管新生相关因子表达以及瘤内微血管密度的影响。结果（1）红景天提取物治疗组的移植瘤体积平均为99.95mm3，较生理盐水对照组（174.60mm3）为低（P=0.535）。（2）与生理盐水对照组相比，红景天提取物治疗4周后移植瘤内乳腺癌细胞Ki-67的染色比例、染色强度降低；H-分数均值为86±34.4，较生理盐水对照组（152.8±33.3）低（P=0.014）。红景天提取物治疗组裸鼠移植瘤内乳腺癌细胞的PCNA染色的H-分数平均为210±27.4，亦低于生理盐水对照组（242±46.4），但未达到统计学显著性检验水平（P=0.221）。（3）在生理盐水对照组的裸鼠移植瘤中，组织蛋白酶D（Cathepsin D）高表达，红景天提取物治疗的移植瘤表达评分均数为72±50.70，低于对照组（168±64.19）（P=0.03）。对照组基质金属蛋白酶MMP-2的表达（176±65.80）亦较红景天提取物治疗组（90±29.15）为高（P=0.04）。（4）红景天提取物治疗组肿瘤细胞VEGF表达的比例和强度均较对照组低，两组免疫组化平均分数的差异（60±30.82比138±58.48）有显著的统计学意义（P=0.03）。红景天提取物治疗组DARC的表达则高于生理盐水对照组，两组免疫组化评分的差异（102±31.14比60±23.45）亦具有统计学显著性意义（P=0.043）。治疗组裸鼠移植瘤内的微血管密度（每高倍视野30.27±7.71）低于对照组（每高倍视野48.13±3.70）（P=0.002）。结论红景天在体外可阻滞乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖周期、降低乳腺癌MDA-MB-435细胞的增殖活性、减少促血管新生因子VEGF以及升高促血管新生清除槽DARC的表达；在裸鼠体内呈现抑制乳腺癌瘤体生长的趋势、降低浸润转移相关的蛋白水解酶与促血管新生因子VEGF的表达、促进抑制肿瘤血管新生的DARC的表达以及抑制移植瘤内微血管新生等作用，并没有发现其促进肿瘤进展的现象。

论文目录

• 摘要
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 红景天提取物对乳腺癌细胞的作用及机制研究
• 前言
• 材料与方法
• 讨论
• 参考文献:
• 第二部分 红景天对裸鼠乳腺癌移植瘤的作用及机制研究
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献:
• 结论
• 综述
• 血管新生在冠心病与肿瘤中的作用
• 血管新生在冠心病中的作用
• 肿瘤与血管新生
• 参考文献
• 己发表文章及参与编写的有关专著
• 致谢