论文摘要
强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）是一种类风湿因子阴性,累及中轴关节和肌腱韧带骨附着点的慢性炎症性疾病,可引起腰痛、晨僵、脊柱活动受限、驼背畸形、外周关节受累、足跟痛等关节症状以及前葡萄膜炎或虹膜炎、心血管表现、肺部表现、骨质疏松等关节外症状。目前,认为遗传因素与该病关系尤为密切,其中HLA-B27又与之尤为密切。目前对HLA-B27的检测方法众多,但都存在一定的缺陷或局限性,且无法对AS进行确诊。信使核糖核酸（Messenger RNA,mRNA）为由脱氧核糖核酸（DNA）转录合成的带有遗传信息的一类单链核糖核酸（RNA）,它在核糖体上作为蛋白质合成的模板,决定肽链的氨基酸排列顺序,与遗传性疾病的发生与表达密切相关。据国外有关文献报道,强直性脊柱炎患者HLA-B27mRNA有着较高的表达水平,且与强直性脊柱炎疾病活动指数（BASDAI）密切相关,因此我们认为采用定量PCR检测HLA-B27mRNA表达可能成为诊断AS的另一重要途径。我们对22例HLA-B27阳性AS患者,5例HLA-B27阴性患者,22例HLA-B27阳性正常人外周静脉血进行了HLA-B27mRNA表达水平检测,以期进一步得到之间的联系。此外,我们还采用DNA测序仪对HLA-B27阳性AS患者血标本进行B27分子亚型的检测,以进一步研究mRNA的表达与B27分子亚型之间的联系。实验中我们首先对门诊和病房中可疑AS患者以及AS患者家族成员进行外周静脉血HLA-B27分子的流式细胞仪的检测,并结合临床症状确诊22例HLA-B27阳性AS患者,5例HLA-B27阴性患者,22例HLA-B27阳性正常人,并筛选20例HLA-B27阴性正常人外周静脉血作为对照组。然后对实验对象外周静脉血进行Total RNA提取,并用RT-PCR试剂盒对Total RNA进行HLA-B27片段反转录及mRNA表达水平的相对定量。此外我们对HLA-B27阳性AS患者进行DNA提取,经PCR扩增后在DNA测序仪上进行了HLA-B27的DNA测序,与已知的B27亚型序列进行比对,得到标本的亚型。实验结果显示,以20例HLA-B27阴性对照组测出的HLA-B27mRNA平均表达水平作为参照（即表达水平为1）,22例HLA-B27阳性AS患者HLA-B27mRNA表达水平最低值为1.16,最高值为37.01,均值为7.77,其中B2704 12例,B2705 10例,分别为54.5%和45.5%,与文献报道接近;22例HLA-B27阳性正常人组,最低值为1.05,最高值为2.10,均值为1.51;以及5例HLA-B27阴性患者, HLA-B27mRNA表达水平的均值为1.19。统计结果显示HLA-B27 mRNA的表达水平与强直性脊柱炎患者疼痛程度密切相关,HLA-B27阳性AS患者组HLA-B27mRNA表达水平显著高于HLA-B27阳性正常人组和HLA-B27阴性对照组,且与亚型无特异性相关。对比分析HLA-B27阳性AS组与HLA-B27阳性正常组流式细胞仪检测的荧光强度,结果显示,两者无统计学差异（P=0.16>0.05）。5例HLA-B27阴性AS患者HLA-B27mRNA表达水平均值为1.19,接近于B27阴性正常人对照组。因此我们认为采用定量PCR检测HLA-B27mRNA表达水平可作为辅诊AS的另一种重要检测方法,特别是在鉴别HLA-B27阳性正常人与HLA-B27阳性患者方面有着较明显的作用,同时检测HLA-B27 mRNA的表达水平,可以成为另一种考察患者病情的确实有效的方法。此外,5例HLA-B27阴性患者测得的HLA-B27mRNA表达水平较低,接近于HLA-B27阴性对照组的表达水平,且亚型检测亦未检测出相关产物,我们认为HLA-B27阴性患者的发病有可能与其他基因相关,或者存在除目前已公布的B27亚型以外的其他的亚型,需要进一步的实验确认。