论文摘要
前言肿瘤发生的共同特征是细胞周期调控机制的紊乱，导致细胞的生长失控。急性白血病是造血细胞恶性克隆性疾病，其显著特征是细胞过度增殖和分化障碍，多种癌基因、抑癌基因及其相关基因功能异常，引起其相应蛋白的变化，导致细胞周期调控紊乱，细胞恶性增殖，促进了白血病的发生发展。细胞周期的运行要实现精确调控，适时的蛋白结构磷酸化或脱磷酸化的改变与特定蛋白的降解一样重要。细胞中磷酸化调节是一种普遍存在的生物现象，细胞内的很多蛋白通过磷酸化或脱磷酸化来活化从而参与细胞功能的调节。磷酸化依赖的脯氨酸异构酶是磷酸化调节中很重要的调控机制。目前的研究认为，磷酸化丝／苏氨酸-脯氨酸残基存在顺式和反式两种构象，而Pin1则通过与磷酸化的丝／苏氨酸-脯氨酸残基结合后，使其构像发生改变，由顺式变为反式，调节蛋白质的功能。Pin1的过表达可能参与了多种肿瘤的发生发展。Cyclin D1是G1／S转换的限速控制因素，抑制cyclin D1的活性，可以使细胞受阻于G1期，限制瘤细胞的增殖，从而抑制肿瘤生长。研究发现，cyclin D1在多种肿瘤中过表达。本研究采用免疫细胞化学法检测Pin1与cyclin D1蛋白在初治急性白血病患者及完全缓解后患者骨髓单个核细胞中的表达情况及它们之间的相关性，探讨其在急性白血病发病中的作用。材料与方法1．研究对象：（1）初治急性白血病骨髓：共收集标本62例，其中男42例，女20例，年龄10～75岁（中位年龄35岁）。包括：①急性髓系白血病（AML）40例，其中M02例，M12例，M220例，M37例，M43例，M23例，M62例，M71例；②急性淋巴细胞白血病（ALL）22例。所有急性白血病患者均依据FAB分型诊断标准划分。（2）完全缓解病人骨髓35例，为初治组完全缓解后标本。（3）对照组为非恶性血液病骨髓正常者。所有研究对象均取自于2006年5月至12月郑州大学第一附属医院就诊患者。2．标本处理：采集急性白血病患者化疗前骨髓和对照者骨髓各1ml，分离单个核细胞，制备细胞滴片，采用免疫细胞化学法染色检测Pin1和cyclin D1蛋白在初治AL（Acute leukemia）、AL-CR及正常对照者骨髓细胞中的表达。3．数据统计：实验数据用SPSS11.0软件进行统计学处理，Pin1蛋白、cyclin D1抗原阳性率比较采用x2检验，变量间的相关分析应用Spearman等级相关分析，以α=0.05为检验水准。结果1．Pin1在正常人骨髓标本中不表达或呈微弱表达。在初治AL患者骨髓单个核细胞中59.7％呈现胞核或胞浆的阳性和（或）强阳性表达，其中AML阳性率为65％，ALL阳性率为50％，两者之间无统计学意义（P＞0.05）。在AL-CR中阳性率为2.9％，其中AML-CR阳性率为4.2％，ALL-CR阳性率为0％，两者之间无统计学意义（P＞0.05）。初治组与正常对照组，初治组与AL-CR组间有显著统计学意义（P＜0.01），AL-CR组与对照组间无统计学意义（P＞0.05），且初治AML与AML-CR间及ALL与ALL-CR间均有统计学意义（P＜0.05）。2．cyclin D1在正常人骨髓标本中不表达或微弱表达。在初治AL患者骨髓单个核细胞中56.5％呈现胞核或胞浆的阳性和（或）强阳性表达，以胞核表达为主，其中AML的阳性率为50％，ALL的阳性率为68％，两者之间无统计学意义（P＞0.05）。在AL-CR中阳性率为2.9％，其中AML-CR阳性率为0％，ALL-CR阳性率为9.1％，两者之间无统计学意义（P＞0.05）。初治组与正常对照组，初治组与AL-CR组间有显著统计学意义（P＜0.01），AL-CR组与对照组间无统计学意义（P＞0.05），且初治AML与AML-CR间及ALL与ALL-CR间均有统计学意义（P＜0.05）。3．相关性分析显示Pin1和cyclin D1在急性白血病患者骨髓中的表达呈正相关（r=0.465，P＜0.05）。4．Pin1和cyclin D1蛋白水平与患者的年龄、性别、白细胞高低及浸润等临床特征无明显相关性（P＞0.05）。结论1．Pin1和cyclin D1在初治AML和ALL患者中的表达均显著高于正常对照组和完全缓解组，提示Pin1和cyclin D1的异常高表达可能参与了急性白血病的发生和发展。2．Pin1与cyclin D1呈正相关，提示Pin1过表达可以促进cyclin D1的表达，Pin1可能为cyclin D1的上层调控因素。