论文摘要
目的：探讨中华眼镜蛇毒细胞毒素-12（Cytotoxin-12，CTX-12，MT-12）联合放射治疗对Balb／c裸鼠皮下移植膀胱肿瘤的生长抑制及诱导凋亡作用，初步探讨CTX-12是否具有对裸鼠移植膀胱癌的放射增敏作用。方法：取置于无特定病原体（SPF）的三级层流室饲养Balb／c雌性裸小鼠40只，取对数生长期的BIU-87细胞株用胰酶消化后配成1.5×107个／ml单细胞悬液，在无菌条件下于裸鼠右侧背部皮下接种0.2ml／只（相当于3.0×106个细胞），建立裸小鼠皮下移植瘤的动物模型，接种时确保每只小鼠的接种部位以及肿瘤细胞数量一致，共接种40只。待肿瘤体积达到0.60±0.09cm3时，将动物随机分成四组：蛇毒+放射组（CTX+R），单纯蛇毒组（CTX），单纯放射组（R），空白对照组（B）。化疗药物及放射剂量均采用根据文献报道和动物体表面积换算出的最佳生理剂量。蛇毒剂量标准为0.5mg／kg（相当于0.01mg／只）溶解于生理盐水0.15ml进行腹腔注射，单次放射治疗的剂量均为4Gy，进行隔天照射，共照射8次，总照射剂量32Gy。空白对照组（B）腹腔注入等量的生理盐水。分组治疗期间每3天利用游标卡尺测量肿瘤最长径和最短径，换算出肿瘤体积，绘制出各组裸鼠移植瘤生长曲线图。停药后次日随机处死每组别6只实验动物，称瘤重并计算抑瘤率、进行放射增敏效应测定、膀胱肿瘤标本HE染色光学显微镜下观察其病理组织学特点及TUNEL系统检测凋亡情况、透射电镜观察凋亡细胞的形态学改变、利用流式细胞术检测各组肿瘤组织凋亡峰和凋亡率、观察荷瘤鼠存活数。结果：与对照组比较，中华眼镜蛇细胞毒素-12单独应用或与放疗结合、单纯放疗组均有抑制Balb／c裸小鼠皮下移植膀胱肿瘤的生长作用（P＜0.05）；但蛇毒联合放射治疗组局部肿瘤生长受到明显抑制，抑瘤率达到77.9％（P＜0.001），明显高于单纯蛇毒组（46.7％，P＜0.05）和单纯放疗组（18.2％，P＜0.01）；蛇毒联合放疗组局部肿瘤生长延缓天数（瘤体积0.6～1.2cm3）超过19天，高于单纯蛇毒组（10天，P＜0.05）和单纯放疗组（5天，P<＜0.01）；光镜和透射电镜下均能观察到凋亡细胞的核固缩、染色质边集、核碎裂、凋亡小体形成等形态学特征，凋亡细胞的形态学和数量变化均以蛇毒联合放射治疗组为著。流式细胞术检测蛇毒联合放射治疗组肿瘤组织凋亡峰和凋亡率最明显（50.8±1.45，p＜0.01），单纯蛇毒组凋亡率为（35.9±1.67，P＜0.05），单纯放射组和空白对照组的凋亡率分别是（21.7±0.98，P＜0.05）、（7.6±0.21）；放射增敏效应测定提示中华眼镜蛇细胞毒素-12对膀胱癌有放射增敏作用；联合放疗组90天内存活的鼠最多（4个），单纯蛇毒组有2个存活，单纯放疗组1个存活，空白对照组的裸鼠全部死亡。结论：中华眼镜蛇细胞毒素-12（CTX-12）可显著地增强Balb／c裸鼠皮下移植膀胱肿瘤细胞放射治疗敏感性，且从治疗过程中观察裸鼠的生存质量没有增加任何不良反应。CTX-12联合放疗腹腔用药能显著抑制Balb／c裸小鼠皮下移植膀胱肿瘤的生长。诱导凋亡可能是蛇毒细胞毒素抗膀胱肿瘤的机制之一。CTX-12联合放疗能显著诱导肿瘤细胞凋亡，同时诱导肿瘤细胞凋亡很可能也是CTX-12实现膀胱肿瘤放疗增敏的重要途径之一。透射电镜是观察凋亡细胞形态特征最可靠的方法。