湖南省柑橘茎陷点型衰退病为害情况调查及其弱毒系筛选研究

论文摘要

湖南作为中国柑橘栽培大省,柑橘产业近几年来得到了快速的发展,面积与产量均已跃居全国第一。长期以来,由于抗柑橘衰退病（CTV）枳（Poncitrustrifoliate）砧的大量使用,使得CTV并未对湖南省的柑橘生产造成太大影响,但近年来随着茎陷点型的CTV强毒系的入侵,该病害对我省的柑橘产业所带来的危害越来越严重,并且由于该病可被蚜虫传播,无毒树也很容易被再感染,所以防治更为困难。因此,本研究旨在摸清湖南省目前柑橘衰退病为害情况的同时,通过RT-PCR结合测序的方法初步筛选出CTV的弱毒株系,为交叉保护试验在生产实践中的应用奠定基础。本研究试验进程及结果如下:1.对湖南省各柑橘产业大县的主栽品种进行了茎陷点型CTV发生为害的初步调查,调查发现部分果园的强毒系病株已经完全失去生产价值,树势极其衰弱,枝叶稀疏黄化严重,茎陷点明显,甚至有完全无果的现象,并且其受害程度随时问的推移而加重。2.通过RT-PCR结合测序的方法对其毒系进行分型研究,结果发现各地区的衰退株系并没有出现非常专一的地区特异性,这可能与目前各县市的品种交流开始频繁起来有关,而衰退株系本身具有特异性,优良但却未经过脱毒的品种通过嫁接繁殖将本地的衰退株系带到别地,成为强毒系。3.初步筛选出CTV弱毒株系。引用了Sambade设计的引物,通过RT-PCR法进行CTV株系鉴定,对经RT-PCR法鉴定为弱毒的样品进行序列的测定,之后再对其进行系统发育树状图进行分析,同时对测得序列相应氨基酸序列的分析。并同时结合酶切的方法,利用ScaⅠ酶及TaqⅠ酶对各株系进行酶切反应进行弱毒系的初步筛选,为CTV弱毒株系的筛选提供进一步的依据。4.交叉保护试验。利用3种常用的CTV指示植物进行了交叉保护（Mild StrainCross Protection,MSCP）试验,观察其筛选出的弱毒系的交叉保护作用能力。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1 文献综述
• 1.1 柑橘衰退病（CTV）的研究进展
• 1.1.1 发生与危害
• 1.1.2 病原
• 1.1.3 寄主范围及传播途径
• 1.1.4 株系分化及症状表现
• 1.1.5 检测及其株系鉴定
• 1.1.6 防治
• 2 研究的目的及意义
• 第二章 湖南柑橘茎陷点型衰退病的发生为害的初步调查
• 1 材料与方法
• 1.1 调查方法
• 1.1.1 初步调查
• 1.1.2 全面调查
• 2 结果与分析
• 2.1 茎陷点型衰退病的为害情况
• 3 讨论
• 第三章 柑橘衰退病的鉴定
• 1 CTV的分子生物学检测
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 试剂及仪器
• 1.1.2 试验材料
• 1.1.3 试验方法
• 1.2 结果与分析
• 1.2.1 总RNA的提取结果
• 1.2.2 RT-PCR检测CTV结果
• 2 CTV的生物学检测
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 工具
• 2.1.2 试验材料
• 2.1.3 试验方法
• 2.2 结果与分析
• 3 讨论
• 第四章 柑橘衰退病的序列测定及同源性分析
• 1 材料与方法
• 1.1 试剂及仪器
• 1.2 试验材料
• 1.3 试验方法
• 1.3.1 PCR产物的纯化及测序
• 1.3.2 测序结果的分析
• 2 结果与分析
• 2.1 CTV p23基因序列的测定及分析
• 3 讨论
• 第五章 湖南省CTV弱毒系的筛选
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 总RNA的提取
• 1.3 引物
• 1.4 RT-PCR
• 1.5 序列的测定及分析
• 1.6 酶切
• 2 结果与分析
• 2.1 RT-PCR法鉴定弱毒系
• 2.2 预选单株生长状况与RT-PCR检测株系的对照分析
• 2.3 CTV p23基因扩增片段的核苷酸序列分析
• 2.4 CTV p23基因对应的多肽序列分析
• 2.5 酶切结果
• 3 讨论
• 第六章 湖南省CTV弱毒系的交叉保护试验
• 1 材料与方法
• 1.1 试验工具
• 1.2 试验材料
• 1.3 试验方法
• 1.3.1 弱毒系接种
• 1.3.2 供试材料的观察及检测
• 1.3.3 强毒系接种
• 2 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 附件A: CTV P23 核苷酸序列片断
• 附件B: CTV P23 氨基酸序列片断
• 致谢
• 个人简历