论文摘要
目的:前期实验表明木贼水煎剂可以调节脂代谢、抑制内皮细胞（endothelial cell, EC）凋亡,抗动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）早期事件的发生。本实验对木贼进行初步提取分离,对比观察提取物对大鼠主动脉EC凋亡的影响及其形态学变化,探讨木贼保护血管内皮的有效部位及其可能机制。方法:1木贼有效部位的提取、分离木贼水煎剂经正丁醇萃取、分离为两部分,其中正丁醇萃取液回收至干,蒸馏水定容至1.25g（生药）/ml;剩余液亦浓缩至相同浓度,均冰箱保存备用。2两种木贼提取物的药效动物实验健康雄性SD大鼠50只,随机分为五组:正常组、模型组、吉非罗齐组、木贼正丁醇提取物组、正丁醇提取剩余物组,每组10只。给药组每天饲喂高脂饲料且按10ml/kg标准灌胃给药,分别合吉非罗齐0.16g/（kg.d） ,生药木贼12.5g/（kg.d）,正常组和模型组每天灌等量生理盐水,并随动物体重增加及时调整药量。3指标检测九周末眶后取血,酶法检测:胆固醇（total cholesterol, TC）、甘油三酯（triglyceride, TG）、高密度脂蛋白（high densitylipoprotein, HDL）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein, LDL）、极低密度脂蛋白（very low density lipoprotein, VLDL）;流式细胞术检测EC周期、凋亡率及相关基因caspase-3、突变型p53、bcl-2蛋白表达,计算细胞增殖指数（proliferative index, PI）;分别以肉眼、光镜及电镜观察主动脉内膜形态变化。结果:1实验大鼠一般状况正常组大鼠饮食正常,活动自如。模型组体重增长较快;但随实验进程,进食减少、精神较差。吉非罗齐组、两木贼给药组大鼠饮食、活动、精神状态均明显好于模型组。2两种木贼提取物对血脂的影响模型组TC、LDL较正常对照组明显升高（P<0.01）;吉非罗齐组TG、LDL、VLDL较模型组显著降低（P<0.01）,HDL明显升高（P<0.01）;两木贼给药组降低TG、VLDL作用与吉非罗齐相似（P<0.05）,提取剩余物组HDL升高显著（P<0.01）,与正丁醇提取物组相比具有统计学意义（P<0.01）。3两种木贼提取物对主动脉EC凋亡相关基因caspase-3、突变型p53、bcl-2蛋白表达的影响EC凋亡率及突变型p53、caspase-3表达模型组较正常对照组明显升高（P<0.05）,吉非罗齐组较模型组显著降低（P<0.05）;正丁醇提取物下调caspase-3表达作用明显（P<0.05）。Bcl-2蛋白表达在各组中均未见明显变化（P>0.05）。4两种木贼提取物对主动脉EC周期与凋亡的影响模型组停留在G0/G1期的EC较正常对照组明显升高（P<0.01）,S和G2/M期细胞百分比显著减少（P<0.01）,PI降低显著（P<0.01）,凋亡率显著升高（P<0.01）;两种木贼提取物对细胞周期的影响与吉非罗齐相似,较模型组停留在G0/G1期细胞百分比显著降低（P<0.01）,S和G2/M期细胞明显增多（P<0.05）,PI显著升高（P<0.01）,细胞凋亡率显著减少（P<0.01）。5主动脉形态学改变5.1肉眼观察正常组血管弹性好,内膜平滑,富有光泽;模型组动脉弹性减低,管壁稍增厚,光泽度稍差;吉非罗齐组、两木贼给药组与正常组相比变化不明显。5.2光镜观察正常组动脉EC连续、形态规则,表面未见细胞粘附,内皮下间隙较小。模型组血管壁增厚,内皮呈不连续性缺失,底层胶原纤维暴露,内皮下间隙明显增宽。吉非罗齐组内皮较连续,形态规则,明显好于模型组。正丁醇提取物组内膜连续、光滑,EC排列整齐,明显好于模型组。提取剩余物组内膜较光滑,部分EC缺失、单核细胞粘附,但好于模型组。两木贼给药组之间未见明显差别。5.3扫描电镜观察正常对照组大鼠主动脉EC长梭形,核区饱满,连接紧密,可见长短不等的典型微绒毛。模型组EC排列紊乱,表面微绒毛减少甚至消失,呈大小不等的虫蚀状、火山口状缺损,可见细胞碎片、纤维素等附着。吉非罗齐组EC形态完整,轮廓清晰,偶见小洞状破损。木贼正丁醇提取物组EC呈带状排列,核区饱满,可见典型微绒毛,散在的脂肪小颗粒黏附。正丁醇提取剩余物组EC连接较紧密,局部坏死、脱落,可见较大脂肪颗粒黏附。5.4透射电镜观察正常对照组大鼠EC胞浆内吞饮小泡丰富,线粒体、内质网形态正常。模型组EC坏死、脱落严重,残存细胞内吞饮小泡、脂质空泡数量明显增多,线粒体肿胀、融合,粗面内质网扩张、脱颗粒。吉非罗齐组EC吞饮小泡、脂质空泡数量减少,部分线粒体肿胀,粗面内质网轻度扩张。木贼正丁醇提取物组EC吞饮小泡、脂质空泡明显减少,部分线粒体轻度肿胀,粗面内质网扩张减轻、脱颗粒。正丁醇提取剩余物组EC吞饮小泡和脂质空泡较多,线粒体、粗面内质网肿胀,游离核糖体散在于细胞质中。结论:两种木贼提取物对AS早期大鼠降脂和保护内皮的效果与前期水煎剂实验结果一致,且两组间未见显著性差异,表明木贼确有调节脂代谢、从基因水平上抑制内皮凋亡、保护内皮抗AS早期损伤的作用。