尪痹颗粒对RA系膜增殖性肾炎细胞模型细胞增殖与细胞周期的影响

论文摘要

目的:原代培养及鉴定大鼠肾小球系膜细胞(GMC),通过MTT比色实验和流式细胞术,探讨(?)痹颗粒(WBKL)血清对RA系膜增殖性肾炎细胞的增殖和细胞周期的影响。方法:体外培养GMC,采用免疫细胞化学,检测亚代GMC的抗结蛋白抗体(Mouse Anti—Desmin)、细胞角蛋白(Cytokeratin)、Ⅷ因子相关抗原抗体的表达,鉴定GMC,并绘制其生长曲线。同时准备大鼠含药血清。传代至3—8代分组实验,即空白对照组,模型对照组,空白血清组,WBKL血清低、中、高剂量组,白芍总苷(TGP)血清阳性对照组,强的松血清阳性对照组。做含药血清的细胞毒性试验。除空白对照组外,其余各组均用AIgG(聚合IgG)刺激,再按血清比例给药,加药后48小时做MTT比色试验,测定各组的吸光值(OD值),并通过流式细胞术观察各组细胞周期的变化。结果:培养4 d后,可见卵圆形上皮细胞生长,18 d左右镜下细胞多呈星状或三角形并伴有不规则的突起,21 d后细胞生长密集,细胞团簇之间形成网络。免疫细胞化学证实抗Desmin染色阳性,而抗Cytokeratin、抗Ⅷ因子抗体染色为阴性。GMC亚代倍增时间为4 d。各组血清均无细胞毒性;模型对照组的OD值明显较空白对照组高(P＜0.001),而WBKL10%、20%血清组的OD值均较模型组低(P＜0.01—0.001),且浓度越高OD值越低。白芍与强的松组的OD值也均较模型组低(P＜0.001)。模型组MC S期细胞比例增高,G1期比例下降,较空白对照组有统计学意义(P＜0.001)。与模型组比较,WBKL血清各组、白芍总苷组、强的松组均能使MC S期细胞比例下降,G1期比例升高,有统计学意义(P＜0.05—0.001)。结论:培养的细胞为大鼠肾小球系膜细胞。各血清组均无细胞毒性,AIgG能刺激系膜细胞增殖,MC S期细胞比例升高,G1期比例下降,WBKL、白芍总苷、强的松含药血清均能抑制AIgG刺激的细胞增殖,且能使模型细胞的细胞周期中MC S期细胞比例下降,G1期比例升高。WBKL可通过影响细胞周期而对系膜细胞有一定的保护作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略词表（中英文对照）
• 实验研究
• 1 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 药品和试剂
• 1.2.1 药品
• 1.2.2 主要试剂
• 1.3 实验仪器
• 1.4 常用液体的配制
• 2 实验方法
• 2.1 原代系膜细胞培养
• 2.1.1 肾小球的分离
• 2.1.2 肾小球的消化
• 2.1.3 接种肾小球
• 2.2 系膜细胞的鉴定
• 2.2.1 GMC形态学特征
• 2.2.2 免疫细胞化学（SABC法）:
• 2.3 细胞传代方法
• 2.4 系膜细胞生长曲线的绘制
• 2.5 分组实验
• 2.5.1 药物含药血清的制备
• 2.5.2 AIgG的制备
• 2.5.3 含药血清的细胞毒性试验
• 2.5.4 阳性对照药血清浓度的筛选
• 2.5.5 实验分组（48孔板中）
• 2.5.6 指标检测方法
• 2.5.6.1 各组细胞的MTT比色实验
• 2.5.6.2 流式细胞术测定GMC的细胞周期
• 统计学分析方法
• 实验结果和分析
• 1 尪痹颗粒含药血清对GMC细胞增殖的影响
• 2 尪痹颗粒含药血清对GMC细胞周期的影响
• 讨论
• 1 阳性药物选择
• 1.1 白芍总苷的免疫调节作用
• 1.2 强的松（醋酸泼尼松）的免疫抑制作用
• 2 中医对RA系膜增殖性肾炎的病因病机的探讨及尪痹颗粒的组方研究
• 2.1 病因病机探讨
• 2.2 尪痹颗粒的组方研究
• 3 RA系膜增殖性肾炎细胞模型
• 4 尪痹颗粒含药血清对系膜细胞增殖的影响
• 5 尪痹颗粒含药血清对系膜细胞的细胞周期的影响
• 结论
• 问题与展望
• 1 问题
• 2 展望
• 参考文献
• 附1:综述
• 参考文献:
• 附图
• 致谢
• 附2:在校期间公开发表的学术论文