一个与小鼠胚胎发育相关新基因0610038D11Rik的研究

论文摘要

研究胚胎发育新基因及其表达规律是揭示胚胎发育基因调控机理的重要途径。我们从18.5天小鼠胚胎脑的cDNA文库中克隆了一个330 bp的cDNA片段,经NCBI检索与0610038D11Rik基因（Genbank登录号为NM026306）具有完全相同性。该基因定位在小鼠19号染色体E1带,基因组全长1325 bp,包含5个外显子,编码125个氨基酸残基蛋白,含有一个Trm112p蛋白结构域,该基因功能未曾报道。本研究采用RT-PCR,原位杂交和Northern blot对该基因进行表达谱分析,细胞免疫染色对其进行细胞结构定位。全胚胎原位杂交结果显示0610038D11Rik在胚胎E9.5（embryonic day）的端脑,间脑,菱脑和听泡处有较强的信号。随着神经管逐渐关闭,胚胎E10.5在背部神经嵴,神经管区也出现表达信号。E11.5时除了在上述部位表达外,心脏部位也检测到较弱的信号。组织切片原位杂交结果显示在胚胎E12.5～E16基因0610038D11Rik的信号普遍表达,除了在脑部,背脊索神经富集外,在肺、肾、肝脏、肠表达明显;在胸腺、颌下腺、舌、肾上腺、骨骼肌肉也有一定表达,而在心脏信号很弱。RT-PCR实验发现该基因在整个小鼠胚胎发育阶段（E8.519.5）均有持续性分布;E15.5的半定量验证了原位杂交的结果,其在多种重要脏器广泛表达,脑、肺、肝、肾表达水平较高,这与新生小鼠的Northern blot实验得到的表达情况相似。细胞定位实验说明其表达的蛋白主要集中在核内和细胞质中。以上研究结果暗示0610038D11Rik基因在小鼠胚胎脑的发育,神经系统和多种器官的形态发生发挥重要的作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1 章绪论
• 1.1 课题背景
• 1.2 国内外研究现状
• 1.2.1 新基因分析方法
• 1.2.2 TA克隆
• 1.2.3 核酸探针技术
• 1.2.4 原位杂交技术
• 1.3 本课题研究的目的和意义
• 1.4 技术路线
• 第2章 材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 动物、菌种、细胞
• 2.1.2 载体
• 2.1.3 主要试剂及配制
• 2.1.4 主要仪器及耗材
• 2.1.5 软件
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 原位杂交（ISH）分析
• 2.2.2 半定量RT-PCR、Norther blot分析
• 2.2.3 细胞转染
• 2.3 本章小结
• 第3章 生物信息分析
• 3.1 引言
• 3.2 基因序列信息
• 3.2.1 0610038D11Rik基因序列
• 3.2.2 基因组定位情况
• 3.3 氨基酸编码蛋白信息
• 3.3.1 氨基酸物理性质
• 3.3.2 蛋白的疏水区分析
• 3.3.3 氨基酸三维结构
• 3.3.4 同源性比对
• 3.3.5 多重序列比对
• 3.3.6 生物信息预测表达谱
• 3.3.7 脑部原位杂交信息预测
• 3.4 本章小结
• 第4章 原位杂交分析
• 4.1 引言
• 4.2 T载体的制备
• 4.2.1 质粒提取及酶切
• 4.2.2 制备T载体
• 4.3 扩增产物的克隆及重组质粒的鉴定
• 4.4 探针的合成
• 4.5 全胚原位杂交分析结果
• 4.6 组织切片原位杂交结果
• 4.7 讨论
• 4.8 本章小结
• 第5章 RT-PCR和Northern blot分析目的基因表达
• 5.1 引言
• 5.2 总RNA提取结果
• 5.3 半定量RT-PCR
• 5.4 Northern blot分析
• 5.5 讨论
• 5.6 本章小结
• 第6章 细胞定位分析
• 6.1 表达载体的构建结果
• 6.1.1 菌落 PCR双酶切验证重组体
• 6.1.2 测序结果
• 6.2 细胞定位结果
• 6.3 讨论
• 6.4 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢