论文摘要
花药培养是建立单倍体体系的有效途径之一,结合传统育种方法可以缩短育种周期,加快新品种选择的进程。有关苦瓜的组织培养研究相对较少,且其主要是进行苦瓜茎段离体快繁和子叶诱导研究。本试验以三个苦瓜品种的花药为外植体材料,从基因型、激素配比、花药不同发育时期、预处理时间、不同碳源及其浓度等方面对苦瓜花药诱导的影响进行了研究,并将诱导所得的苦瓜花药愈伤组织分为不同状态分别进行分化诱导培养。本试验的主要结论如下:1.各品种的花蕾大小与花药发育时期符合以下相关性:当花蕾长度为2.5～3.5mm时花药处于四分体时期;花蕾长度为3.5～4.5mm时为单核早期;花蕾长度为4.5～6.0mm时为单核中晚期。2.当MS培养基中2,4-D浓度为2.0mg/L、6-BA浓度2.0 mg/L时,各品种的花药愈伤组织诱导率最高,长白苦瓜达到了94.74%,大白苦瓜为82.14%,碧秀苦瓜为65.91%。6-BA浓度为2.0mg/L时较利于碧秀苦瓜和大白苦瓜花药愈伤的诱导,高于或低于2.0mg/L时的愈伤组织诱导率均有所下降,而长白苦瓜在6-BA3.0mg/L、2,4-D1.0mg/L和2.0mg/L时愈伤组织诱导率仍保持较高。2,4-D浓度的变化对花药愈伤组织的诱导影响明显,低浓度2,4-D处理中各品种出愈率均较低,随着其浓度增加,各品种花药愈伤组织诱导普遍更快、更多,但2,4-D浓度越高时愈伤组织的褐化速度越快。3.每个品种都以单核中晚期的花药愈伤诱导率最高,显著的高于四分体时期和单核早期。单核中晚期时,碧秀苦瓜、大白苦瓜、长白苦瓜的愈伤组织诱导率分别达到79.74%、74.79%、89.38%。4.与很多其它花药离体培养中低温预处理促进花药诱导的结论相反,本次试验中4℃预处理出现负效应。供试的三个苦瓜品种花药的愈伤组织诱导率均随着低温预处理时间的延长而逐渐下降,均以未经过预处理的花药愈伤组织诱导率最高。预处理天数达4天时,愈伤组织诱导率大幅下降,碧秀苦瓜由53.19%降到18.18%,大白苦瓜由74.82%降到24.38%,长白从88.40%降到26.83%。5.蔗糖作为碳源比葡萄糖作为碳源更利于花药愈伤组织的诱导。碧秀苦瓜在蔗糖浓度为3%时诱导率最高,为83.33%,随着蔗糖浓度增高,出愈率逐渐降低。大白苦瓜和长白苦瓜则在蔗糖浓度为5%时的出愈率高于其他处理,分别达到70.23%和72.73%。以葡萄糖作碳源时,各品种的愈伤组织诱导率普遍明显降低。葡萄糖浓度为7%时大白苦瓜和长白苦的出愈率均在10%以下,碧秀苦瓜甚至无愈伤组织产生。6.诱导出的愈伤组织大致可分为两种类型:一类为黄白色、表面有瘤状突起,转入分化培养基后较快转绿,体积增大明显,处理为（2）6-BA2.0mg/L,KT1.0 mg/L,NAA0.2mg/L时愈伤生长状况最好;另一类呈黄白色,表面无瘤状突起,色泽晶莹,不容易转绿,体积增长不明显,在处理（4）6-BA3.0 mg/L、KT1.0 mg/L、麦芽糖30g/L中有所转绿,在处理（1）6-BA1.0mg/L、KT1.0 mg/L、NAA1.0 mg/L中虽然未转绿,但较好的保持了原有质地状态。7.合适的激素配比对愈伤的生长状况起重要作用。适当提高6-BA浓度能促进愈伤组织的转绿和增大。NAA对于黄白色愈伤组织的保存起重要作用。ZT对于苦瓜花药愈伤组织的生长则无明显促进作用。在处理（1）6-BA1.0mg/L,KT1.0 mg/L,NAA1.0mg/L中,长白苦瓜的一些愈伤组织分化出了根。