新基因PRR11在肺癌中作用的初步研究

论文摘要

PRR11（proline rich11）是本实验室近年来发现的一个新肿瘤相关基因，定位于染色体17q22，目前鲜有对其功能研究的报道。我们在前期研究中成功克隆了PRR11的全长cDNA，生物信息学分析发现PRR11可能是一个进化保守的基因，可能与细胞增殖有关，同时还发现PRR11在多种肿瘤组织中的表达均上调。本研究则是在此基础上对PRR11在肺癌中的作用进行初步分析，分述如下：（1）PRR11在肺癌组织中的表达水平分析:采用定量PCR方法分析了PRR11基因在40例肺癌组织和8例相应正常肺组织中的表达水平。结果表明与相应正常肺组织相比，PRR11mRNA在肺癌组织中表达水平显著升高。同时发现，PRR11mRNA表达水平高低与其肺癌的分化程度、临床分期、转移和组织学病理分型密切相关，PRR11mRNA表达水平随着分期增加而增加，随着分化程度增加而增加。采用免疫组织化学（IHC）方法分析了PRR11蛋白在32例肺癌组织和8例相应正常肺组织中的表达水平。结果表明与相应正常肺组织相比，PRR11蛋白在肺癌组织中表达水平显著升高，且鳞癌中PRR11蛋白水平显著高于腺癌。（2）抑制PRR11表达对肺癌细胞增殖和细胞周期的影响：设计合成PRR11siRNA，转染至肺癌细胞H1299、HCC827和A549，实时定量PCR和western blot分析结果表明PRR11siRNA能在mRNA及蛋白质水平有效抑制PRR11基因的表达。MTT结果表明siRNA介导的PRR11表达抑制可以显著抑制肺癌细胞的生长增殖。细胞周期分析结果显示，抑制PRR11表达可以导致肺癌细胞呈现S期阻滞。（3）抑制PRR11表达对肺癌细胞迁移以及体内外成瘤的影响：首先成功构建了抑制PRR11基因表达的shRNA载体以及阴性对照载体，然后将上述两个质粒分别转染至H1299细胞，成功筛选出PRR11表达抑制稳定细胞株和相应阴性对照稳定细胞株，分别命名为pPRR11-sh和pControl-sh。采用上述细胞株进行了划痕实验以及软琼脂克隆形成实验分析PRR11表达抑制后肺癌细胞迁移及克隆形成能力的改变。划痕实验结果表明，与对照组相比，抑制PRR11表达后，肺癌细胞迁移能力受到显著抑制。软琼脂克隆形成实验结果表明，与对照组相比，抑制PRR11表达后，肺癌细胞在软琼脂上克隆形成能力受到显著抑制。将上述稳定细胞株分别接种至46周龄裸鼠背部皮下组织，观察记录肿瘤形成时间，自成瘤开始每周测量两次并记录瘤径变化，接种约45天后，处死裸鼠，剥离肿瘤组织并称重。结果表明，PRR11表达抑制组瘤体重量和体积（0.1±0.05g,90±59mm3）约只有对照组（0.8±0.5g,815±404mm3）的12%和11%，肿瘤的生长受到明显抑制。综上，本研究发现，与相应正常肺组织相比，肺癌组织中PRR11基因在mRNA和蛋白质水平上均显著升高，抑制该基因的表达可显著抑制肺癌细胞的生长增殖、迁移以及成瘤能力，这对于经后进一步深入研究PRR11在肺癌及其他肿瘤的发生发展中的作用机制以及促进以PRR11为分子靶点的诊断和治疗研究均具有积极的理论和现实意义。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 PRR11在肺癌组织中的表达水平分析
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第二部分 抑制PRR11表达对肺癌细胞增殖和细胞周期的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第三部分 抑制 PRR11 表达对肺癌细胞迁移以及体内外成瘤的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 文献综述：小鼠异体移植瘤模型在抗癌药物筛选中的应用
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的文章