氟喹诺酮类药物的筛选及达氟沙星间接竞争ELISA检测方法的建立

论文摘要

氟喹诺酮类（Fluoroquinolones, FQNs）药物是一种人工合成的新型抗菌药物,随着广泛用于动物和人类的多种感染性疾病的治疗[1～2],其残留问题已引起了人们的高度重视。目前,检测FQNs药物残留常用的方法有HPLC[3～5]、ELISA等,其中ELISA法操作简便,灵敏度又高,适用于大量快速检出残留药物。本研究旨在建立这种间接竞争ELISA残留检测的方法。本实验首先是把常用的恩诺沙星（ENRO）、诺氟沙星（NFLX）、达氟沙星（DFLX） 3种FQNs类药物,用N-羟基琥珀酰亚胺法与牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）偶联成各自的完全抗原,并且进行紫外扫描光谱等鉴定。通过免疫新西兰白兔制备出了各自的抗血清。然后采用间接竞争ELISA分别与其它几种常用的FQNs类药物（恩诺沙星、沙拉沙星、诺氟沙星、达氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、氧氟沙星、培氟沙星）做竞争反应。通过计算交叉反应率,成功的筛选出了达氟沙星（DFLX）能同时与本身及恩诺沙星（ENRO）、沙拉沙星（SALX）、诺氟沙星（NFLX）、洛美沙星（LMLX）、氧氟沙星（OFLX）5种FQNs类药物同时发生竞争反应,且交叉反应率较高。优化ELISA条件后,理想的包被抗原浓度为1.25μg/L,多抗（DFLX-PcAb）的工作浓度为1:10000,酶标二抗的工作浓度为1:4000。并且得到回归方程（y=0.7975-0.125x R2=0.989）、标准曲线和最适检测范围（0.1～10ng /L）。通过评价这种方法,可得批内和批间变异系数分别为3.81%和6.25%;准确度（标准回收率）为104.41%;灵敏度（最低检测限）为0.8ng/mL。以上各项指标均符合ci-ELISA检测的要求,从而建立了DFLX药物残留的间接竞争ELISA检测法。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 氟喹诺酮类药物残留检测方法的研究进展
• 1.1 定量分析方法
• 1.2 定性分析（筛选）方法
• 1.3 结语
• 第二章 FQNs 类药物的筛选
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 第三章 达氟沙星间接竞争ELISA 检测方法的建立
• 3.1 材料
• 3.2 方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历