论文摘要
目的:研究Mel及其受体激动剂Tal对FFA诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗相关蛋白IRS-1及其磷酸化蛋白（PS307）和GLUT-4表达以及葡萄糖摄取能力的影响。方法:实验分为三个部分,第一部分是细胞的诱导分化,用经典的“鸡尾酒”法即IBMX、的塞米松和胰岛素三联培养诱导3T3-L1成纤维细胞分化成脂肪细胞,并用油红O染色鉴定脂肪细胞形态。第二部分是利用FFA诱导脂肪细胞的胰岛素抵抗,检测细胞葡萄糖摄取能力,检测IRS-1、PS307和GLUT-4蛋白质表达,选择有效的时间和浓度的FFA来处理细胞。第三部分是检测Mel及其受体激动剂Tal对FFA处理的3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取能力及其相关蛋白表达的影响。采用Western印迹分别检测IRS-1、PS307和GLUT-4蛋白质表达;采用液体闪烁法检测细胞葡萄糖摄取能力。结果:用“鸡尾酒”法诱导3T3-L1成纤维细胞10～12天以后, 90%分化成为脂肪细胞,油红O染色可见呈圆形,脂滴很多呈典型的“戒环样”形态。用棕榈酸诱导脂肪细胞发生胰岛素抵抗,结果显示6小时的棕榈酸处理后,细胞的葡萄糖摄取能力明显降低。对FFA处理的时效研究显示6小时左右,胰岛素信号通路的关键蛋白IRS-1的表达开始显著下降,GLUT-4也下降约50%,对棕榈酸处理的量效研究显示,棕榈酸在200μM左右可以促进IRS-1的磷酸化,300μM以后的增加不显著。采用300μM浓度处理6小时来进行后续的研究,并在棕榈酸处理结束前1小时加入不同浓度Mel或其受体激动剂Tal,随着Mel浓度的增加IRS-1的表达变化不显著,而在高剂量组（>1nM）时,PS307/IRS-1的比值是不断降低的,低剂量组有所回升（100pM与高剂量各组相比,P<0.05）,但是都要低于FFA单独处理组。对Mel的受体激动剂Tal浓度效果的研究显示其在10nM左右最佳。Mel可以提高FFA处理的3T3-L1脂肪细胞GLUT-4的表达和葡萄糖摄取,且Mel/Tal与胰岛素合用时效果更显著。结论:FFA可以降低胰岛素诱导的体外培养的脂肪细胞葡萄糖摄取能力,可能是胰岛素抵抗的病因之一。FFA通过降低胰岛素信号通路中非常关键的IRS-1的表达,升高其丝氨酸307位点的磷酸化从而抑制正常的酪氨酸磷酸化使胰岛素信号通路受阻。并且降低其下游的调节蛋白GLUT-4的表达,减少脂肪细胞葡萄糖的摄取。Mel可以干预FFA的作用,尤其是高浓度的Mel可以升高IRS-1的表达,减少其异位的磷酸化,并可以增加细胞的葡萄糖摄取能力,对Mel受体Tal的研究显示其作用可能是通过Mel的受体途径介导的,且Mel与胰岛素的信号可能存在相互协同。
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