顺序注射—在线固相萃取分离富集蛋白质

论文摘要

蛋白质是生命的载体。在生命科学研究中常常需要将微量的蛋白质从复杂基体中分离出来。本实验从蛋白质的分离富集着手,以建立简便、快速的分离分析方法。论文第一章主要介绍了与蛋白质分离纯化技术相关的基本理论以及固相萃取技术。第二章以多壁碳纳米管为分离富集材料,建立了顺序注射-在线分离富集紫外可见分光光度法测定血红蛋白的方法。实验中在多壁碳纳米管的表面,通过螯合剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵（APDC）与金属Cd（Ⅱ）连接,处理后的多壁碳纳米管柱实现了对血红蛋白的富集分离。标准血红蛋白在水溶液中可以完全富集,然后用pH为8的由0.5 mol L-1NaCl和60 mmol L-1咪唑溶液组成的磷酸盐缓冲溶液即可洗脱,与紫外可见分光光度计联用,在波长410 nm处检测。在最佳实验条件下,血红蛋白的富集倍率为10,方法精密度为3.0%(5μg mL-1,n=7),检出限为0.32μg mL-1,线性范围为1-10μg mL-1。利用十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行检验,通过电泳图得知,血红蛋白被多壁碳纳米管很好的保留并洗脱下来,达到了预期的目的。第三章以蚕丝蛋白为固定相,建立了顺序注射-紫外可见分光光度计联用在线分离富集细胞色素C的研究。细胞色素C在水溶液中即可完全保留在蚕丝蛋白的表面,用1mol L-1 NaCl可以完全洗脱,然后与紫外可见分光光度计联用,在波长410 nm处检测。在最佳实验条件下,细胞色素C的富集倍率为10,方法精密度为2.5%(5μg mL-1,n=9),检出限为0.33μg mL-1,线性范围为1-10μg mL-1。利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行检验,通过电泳图得知,细胞色素C被蚕丝蛋白很好的保留并洗脱下来,达到了预期的目的。论文第四章则是结论部分,将两种方法进行比较总结。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第1章 概述
• 1.1 蛋白质的研究发展
• 1.1.1 蛋白质的研究历史
• 1.1.2 蛋白质的结构特点
• 1.1.3 蛋白质分离纯化基本理论
• 1.1.4 蛋白质纯度检验方法
• 1.2 固相萃取
• 1.2.1 原理、方法
• 1.2.2 固相萃取材料
• 第2章 多壁碳纳米管金属螯合分离富集血红蛋白
• 2.1 引言
• 2.2 金属螯合法以及实验原理
• 2.2.1 金属螯合法
• 2.2.2 实验原理
• 2.3 实验部分
• 2.3.1 实验仪器
• 2.3.2 实验试剂
• 2.3.3 溶液的配制
• 2.3.4 实验操作过程
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 金属螯合多壁碳纳米管微柱的制备
• 2.4.2 金属螯合多壁碳纳米管微柱分离富集血红蛋白
• 2.5 分析性能
• 2.5.1 标准曲线
• 2.5.2 检出限
• 2.5.3 精密度
• 2.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）
• 2.6.1 实验原理
• 2.6.2 实验步骤
• 2.6.3 电泳实验结果
• 2.7 本章小结
• 第3章 蚕丝蛋白微填充柱在线分离富集细胞色素C
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 实验原理
• 3.2.2 实验仪器
• 3.2.3 实验试剂及配制
• 3.2.4 微柱制备
• 3.2.5 实验流程
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 方法研究
• 3.3.2 富集洗脱条件的选择
• 3.4 分析性能
• 3.4.1 标准曲线
• 3.4.2 检出限
• 3.4.3 精密度
• 3.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）
• 3.6 本章小结
• 第4章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文