PRDM1与Rb相互作用对细胞周期调控的影响

论文摘要

目的：通过对PRDM1 a、β与Rb三者的内在联系及它们在细胞周期调控中的不同功能的研究,进一步揭示PRDM1蛋白与Rb相互作用对细胞周期的影响。方法：实验分为四部分。第一部分,将特异性针对Rb基因的SiRNA （SiRb）转染到Hela细胞,建立一过性敲除Rb蛋白的细胞模型,转染了无关SiRNA （SiNS）的Hela细胞作为阴性对照。第二部分,分别在敲除和未敲除Rb的Hela细胞中转染PRDM1 a表达载体或其阴性对照空载体,细胞经PI染色后通过流式细胞仪检测分析,观察对比在Rb去除前后PRDM1 a对细胞周期调控的影响。第三部分,分别在敲除和未敲除Rb的Hela细胞中转染PRDM1β表达载体或其阴性对照空载体,细胞经PI染色后通过流式细胞仪检测分析,观察对比在Rb去除前后PRDM1β对细胞周期调控的影响。第四部分,分别在长势良好的Rb+hela细胞中转入含空载体的质粒,含PRDM1 a cDNA的质粒和含PRDM1βcDNA的质粒,通过western blot蛋白电泳检测,观察Rb蛋白的表达状态和磷酸化程度。结果：1.在有Rb表达的hela细胞系中PRDM1a可以将大部分细胞阻滞在G1期。在无Rb表达的hela细胞系中PRDM1a对细胞周期G1的阻滞功能解除。2.Rb基因敲除前后,PRDM1β在Hela细胞中的表达均不导致细胞周期G1期的阻滞。3. PRDM1a在Hela细胞中过表达可使部分Rb蛋白维持在非磷酸化即活化状态,而PRDM1β不具有此作用。结论：PRDMla可诱导部分肿瘤细胞阻滞在细胞周期G1期,此作用依赖于Rb蛋白的存在,而且该作用机制的分子基础之一是因为PRDM1a可使部分Rb蛋白维持在非磷酸化即活化状态。PRDM1β不具有上述功能。本研究结果提示PRDM1a和PRDM1β具有不同的生物学功能,PRDMla可能具有抑癌基因的作用,而PRDM1β可能与肿瘤进展有关。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 引言
• 第一节 PRDM1基因及蛋白简介
• 1.1.1 PRDM1基因的发现
• 1.1.2 PRDM1基因的结构
• 1.1.3 PRDM1基因的表达和对靶基因的调控
• 1.1.4 PRDM基因家族
• 1.1.5 前期工作及实验思路的形成
• 第二章 研究方法
• 第一节 材料来源
• 第二节 实验仪器
• 第三节 实验试剂
• 第四节 相关溶液
• 第五节 实验方法
• 2.5.1 细胞培养
• 2.5.2 重组质粒的转化
• 2.5.3 质粒DNA的提取
• 2.5.4 质粒DNA转染
• 2.5.5 SiRNA的转染
• 2.5.6 流式细胞仪细胞周期检测PI染色法
• 2.5.7 Western免疫印迹
• 第三章 实验结果
• 第一节 SIRNA的细胞转染率和对RB基因的敲除效率的测定
• 第二节 PRDM1A与PRDM1B CDNA表达质粒在细胞中的转染效率的测定
• 第三节 RB基因敲除后PRDM1A对细胞周期调控的影响
• 第四节 RB基因敲除后PRDM1B对细胞周期调控的影响
• 第五节 PRDM1对RB蛋白磷酸化的影响
• 第四章 讨论
• 第一节 PRDM1A与B蛋白结构的差异决定了他们功能的差异
• 4.1.1 PRDM1的表达与主要靶基因
• 4.1.2 PR结构域和PRDM家族
• 4.1.3 PRDM1α与β蛋白结构的差异决定了他们功能的差异
• 第二节 PRDM1A通过与RB相互作用而实现对细胞周期的抑制功能
• 4.2.1 细胞周期与Rb蛋白
• 4.2.2 PRDM1α通过与Rb相互作用而实现对细胞周期的抑制功能
• 第三节 临床意义与展望
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历