论文摘要
目的:探讨熊果酸（UA）诱导结肠癌HT-29细胞株凋亡的作用机制,及其相关基因的表达。 方法:用不同浓度的熊果酸处理HT-29细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色检测熊果酸对HT-29细胞的增殖抑制效应;采用细胞形态学、TUNEL法、流式细胞术检测细胞凋亡的发生;应用免疫组织化学S-P法检测凋亡相关基因caspase-9,bax表达的变化。 结果:MTT法显示熊果酸在体外对HT-29细胞有增殖抑制效应,30μmol/L的UA在作用24 h后即表现较显著的增殖抑制作用,且呈较明显的浓度和时间依赖性;在熊果酸作用下,倒置显微镜下可见HT-29细胞出现细胞核固缩断裂成碎块,核膜消失,细胞膜完整且有突起,等细胞凋亡征象;30μmol/L UA作用24h的HT-29细胞,TUNEL染色后可见部分细胞的胞核呈棕黄色,核固缩成团、聚集成环状或碎裂,形成凋亡小体;流式细胞术检测30μmol/L UA作用24h后开始出现G0/G1期阻滞,S期降低,与对照组相比开始呈现统计学意义（P<0.05）;随着UA浓度的升高和时间的延长,细胞周期的改变越加明显,AJ逐渐升高,其作用具有浓度和时间依赖性,50μmol/UA作用72h后的凋亡率最高,AI值为11.63%,细胞免疫组化法可见,caspase-9和bax的蛋白表达主要定位于胞浆,亦可见于胞膜和核膜。随着UA浓度的升高及作用时间的延长,caspase-9和bax的表达逐渐增强,30μmol/L作用24 h后caspase-9和bax的表达与对照组相比增强,并呈现统计学意义;随着UA浓度的升高及作用时间的延长,两者的表达逐渐增强。 结论:熊果酸在体外对HT-29细胞有一定的增殖抑制和杀伤作用,并有诱导其凋亡的作用。熊果酸可能通过直接损伤DNA,阻滞细胞G0/G1期从而延长细胞周期,降低细胞的恶性增殖。熊果酸可以上调HT-29细胞内bax的表达,故它能够增强细胞对凋亡诱导因素的敏感性。熊果酸作用下HT-29细胞内caspase-9酶原活化并呈时间和剂量依赖性,说明熊果酸对HT-29细胞作用的机制是通过诱导细胞凋亡实现的。
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