不同强度运动对小鼠CD4+CD25+调节性T细胞及核酸疫苗免疫效果影响的研究

论文摘要

目的探讨不同强度运动对小鼠CD4+CD25+调节性T细胞（Regulatory T cells,Treg）及HBV DNA疫苗（pVAX-S2）免疫效果的影响,为大强度运动造成的免疫抑制现象和适宜运动强度增进健康以及不同强度运动对HBV DNA疫苗免疫效果的影响等提供理论依据。方法将C57BL/6小鼠96只随机分为四组:正常对照组（Na?ve）、中等强度运动组（MIE）、大强度运动组（HIE）、跑台对照组（CK）,构建不同强度运动模型。其中实验各组一半小鼠于运动第0、14和28天肌肉注射HBV DNA疫苗pVAX-S2进行免疫。6周后处死取材,未免疫小鼠利用RT-PCR检测细胞因子基因IL-12p40（IL-12）、TGF-β、IL-35、IL-2的表达;流式细胞仪术检测细胞因子IL-10、IFN-γ、脾总淋巴细胞IL-2Rα（CD25）、CD4+T淋巴细胞亚群IL-2Rα（CD25）、CD4+CD25+Treg细胞特异性标志物Foxp3及CD4+CD25+Treg的效应分子IL-10的表达。对HBV DNA疫苗pVAX-S2免疫小鼠利用流式细胞仪术检测了T淋巴细胞增殖能力、特异性抗原肽T淋巴细胞毒性及CD4+和CD8+淋巴细胞亚群IFN-γ和CD4+T淋巴细胞亚群IL-4的表达。通过定量ELISA法检测乙肝抗体IgG。结果1.HIE能够显著增强抗炎症因子IL-10、TGF-β、IL-35等的表达而抑制促炎症因子IL-2、IL-12、IFN-γ的表达。MIE对抗炎症因子IL-10、TGF-β、IL-35的表达影响不显著,但却可以显著增加促炎症因子IL-2、IL-12和IFN-γ的表达。2.MIE和HIE都显著增加了脾总淋巴细胞IL-2受体（CD25）的表达。3.HIE显著增加了CD4+T淋巴细胞亚群IL-2Rα（CD25）、CD4+CD25+Treg细胞特异性标志物Foxp3及CD4+CD25+Treg的效应分子IL-10的表达。而MIE对CD4+T淋巴细胞亚群IL-2Rα（CD25）、CD4+CD25+Treg细胞特异性标志物Foxp3及CD4+CD25+Treg的效应分子IL-10的表达影响不显著。4.MIE增强了接种HBV DNA疫苗pVAX-S2后小鼠的细胞免疫功能。如:显著增强了CD4+和CD8+T细胞IFN-γ的水平、T淋巴细胞增殖能力、特异性抗原肽T淋巴细胞毒性。而HIE却显著减弱了其细胞免疫功能。与对照组相比HIE和MIE组乙肝抗体IgG的产生及CD4+T细胞IL-4的表达不显著。结论大强度运动可能通过增加小鼠CD4+CD25+Treg的数量和抗炎症因子的表达进而抑制HBV DNA疫苗的细胞免疫反应。而中等强度运动对小鼠CD4+CD25+Treg影响不显著,可能主要通过增加促炎症因子的表达来提高机体的免疫功能,进而增强HBV DNA疫苗的细胞免疫反应。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 1 选题依据
• 2 研究假设和研究任务
• 3 研究目的及意义
• 1 研究材料和方法
• 1.1 实验对象、运动方案与取材
• 1.1.1 动物饲养
• 1.1.2 运动方案及取材
• 1.2 主要试剂及溶液配制
• 1.2.1 实验动物免疫主要试剂
• 1.2.2 细胞因子胞内胞外染色主要试剂及溶液配制
• 1.2.3 RT-PCR 主要试剂
• 1.2.4 定量ELISA 检测IgG 含量、体内T 淋巴细胞细胞毒性、体外T 淋巴细胞增殖实验主要试剂及溶液配制
• 1.3 实验主要仪器设备
• 2 实验方法及步骤
• 2.1 实验动物的免疫
• 2.2 小鼠脾淋巴细胞悬液的制备
• 2.3 细胞计数
• 2.4 细胞因子胞内染色
• 2.5 细胞因子表面染色
• 2.6 引物设计
• 2.7 RNA 的提取
• 2.8 逆转录
• 2.9 PCR 扩增
• 2.10 血清的收集
• 2.11 定量ELISA 检测IgG 含量
• 2.12 体内细胞毒性实验
• 2.13 体外T 淋巴细胞增殖实验
• 2.14 统计学分析
• 3 实验结果
• 3.1 不同强度运动对促炎症因子和抗炎症因子表达的影响
• 3.2 不同强度运动对IL-2Rα（CD25）、IL-2 和IFN-γ表达的影响
• +CD25⁺Treg 的影响'>3.3 不同强度运动对CD4⁺CD25⁺Treg 的影响
• 3.4 不同强度运动对 HBV DNA 疫苗的影响
• 4 分析与讨论
• 5 结论
• 6 致谢
• 7 参考文献
• 8 英文缩略词表
• 9 文献综述
• 10 个人简历