论文摘要
Calpains是存在于细胞内的一类钙离子依赖性的蛋白水解酶,通过蛋白水解作用活化或抑制其底物而发挥功能。相关研究已证明calpains家族成员参与细胞迁移、增殖及凋亡等多种细胞学过程。子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞增殖及迁移能力均较正常育龄妇女子宫内膜间质细胞增强,但具体机制不清。我们研究发现CAPN 7（Calcium-Activated Neutral Protease 7,半胱氨酸蛋白酶7）在子宫内膜异位症患者在位子宫内膜组织及间质细胞中表达显著增高,提示CAPN 7可能与子宫内膜异位症发病机制相关。Western Blotting及CCK-8（Cell Counting Kit-8）增殖实验结果表明感染CAPN 7腺病毒后,伴随CAPN 7蛋白表达量的增加人子宫内膜间质细胞中Cyclin D1及Cyclin D3蛋白的表达增加,同时其增殖能力较对照组增高1.5倍（**P<0.01）;基因沉默内源性CAPN 7表达后,人子宫内膜间质细胞中Cyclin D1及Cyclin D3蛋白的表达减少且增殖能力降低15%（*P<0.05）。另外,calpains活性抑制剂PD150606可抑制CAPN 7对人子宫内膜间质细胞增殖的影响,并明显降低子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞的增殖能力。进一步通过细胞划痕实验及Trans Well侵蚀实验来检测CAPN 7对人子宫内膜间质细胞迁移及侵蚀的影响。细胞划痕实验结果表明人子宫内膜间质细胞感染CAPN 7腺病毒后,迁移率较对照组升高并且在感染病毒后的24、48及72小时分别较对照组增高1.2、1.3及1.7倍（**P<0.01）。基因沉默内源性CAPN7表达后,伴随CAPN 7蛋白表达量的降低人子宫内膜间质细胞迁移率在转染后的所有时间点均较对照组降低10﹪（**P<0.01,*P<0.05）。Trans Well侵蚀实验结果表明过表达CAPN 7促进人子宫内膜间质细胞侵蚀,较对照组增高约2倍（*P<0.05）;而基因沉默CAPN 7表达后,人子宫内膜间质细胞侵蚀能力较对照组降低65﹪（*P<0.05）。在以上实验结果基础上,通过实时定量PCR、Western Blotting及明胶酶谱实验来初步探讨CAPN 7影响人子宫内膜间质细胞迁移及侵蚀的可能机制。结果表明CAPN 7明显影响MMP-2（Matrix Metalloproteinase 2,基质金属蛋白酶2）表达及活性,但对MMP-9（Matrix Metalloproteinase 9,基质金属蛋白酶9）表达及酶活性影响不明显;同时,我们还发现CAPN 7明显影响TIMP-2（Tissue Inhibitor of Metalloproteinases 2,基质金属蛋白酶抑制剂2）表达,但对TIMP-1（Tissue Inhibitor of Metalloproteinases 1,基质金属蛋白酶抑制剂1）表达的影响无统计学差异。通过比较CAPN 7对MMP-2及TIMP-2表达的影响程度,我们发现CAPN 7对MMP-2表达的影响较TIMP-2明显。并且我们还发现MMP-2活性抑制剂OA-Hy明显降低CAPN 7对人子宫内膜间质细胞迁移及侵蚀的影响,较对照组分别降低50﹪及55﹪（**P<0.01）。由此我们得出结论CAPN 7通过破坏MMP-2及TIMP-2表达平衡来影响MMP-2的酶活性,从而影响人子宫内膜间质细胞迁移及侵蚀。Calpains抑制剂PD150606降低子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞迁移及侵蚀进一步验证了CAPN 7与子宫内膜异位症密切相关。综上所述,本研究发现并证实CAPN 7高表达于子宫内膜异位症患者在位子宫内膜组织及间质细胞中,并且明显促进人子宫内膜间质细胞增殖、迁移及侵蚀。这些研究为理解子宫内膜异位症发病机制提供新的理论基础。