密蒙花总黄酮对去势雄鼠干眼症TGF-β1和IL-1β表达的影响

论文摘要

目的：观察密蒙花总黄酮对去势导致干眼症雄鼠泪腺、角膜局部炎症因子TGF-β1、IL-1β含量及TGF-β1mRNA表达的影响,评价密蒙花总黄酮的实验疗效,探讨其对干眼症的治疗机制。方法：选用健康1月Wistar雄性大鼠150只,随机分为正常组（A）、假手术对照组（B）、模型组（C）、雄激素治疗组（D）、密蒙花总黄酮治疗组（E）；将C组、D组、E组切除双侧睾丸及附睾；B组切开阴囊,不切除睾丸。造模后1周,待伤口基本愈合开始用药。A组、B组、C组以生理盐水5ml／kg灌胃,1次／天；D组用丙酸睾酮注射液以2：23与麻油稀释后按0.5mmg／kg大腿肌肉注射,1次／3天；E组以0.4%密蒙花总黄酮与生理盐水混悬液5ml／kg灌胃,1次／天。造模后第1、3、5月,对所有动物行SchimerⅠ试验、泪膜破裂时间及角膜荧光素染色检查后处死,取双眼泪腺、角膜组织,电镜、免疫组织化学方法进行病理学与超微结构观察,并检测各组泪腺和角膜上皮细胞中炎症因子TGF-β1、IL-1β含量,实时定量PCR检测TGF-β1 mRNA的表达。结果：1. SIT、BUT、角膜荧光素染色：在整个实验过程中A、B组SIT、BUT及角膜荧光素染色无明显变化（P>0.05）；C组3月后角膜荧光素染色阳性,且随观察时间延长加重；5月后泪液浸湿滤纸长度较实验前短、泪膜破裂时间明显低于A组,且随观察时间的延长差异有显著性（P<0.05）；D、E组于造模3、5月后,角膜荧光素染色低于C组,泪液浸湿滤纸长度、泪膜破裂时间明显高于C组,差异有显著性（P<0.05）；D、E两组间3月后,SIT、BUT及角膜荧光素染色无显著性差异（P>0.05）,而5月后差异有显著性（P<0.05）。2.泪腺超微结构观察：超微结构观察3个阶段A、B组泪腺细胞内结构清楚,未见炎性细胞；C组3个月时可见少许炎性细胞,5个月时D、E组较C组相比局灶凋亡坏死明显较轻。3.免疫组织化学结果：造模5个月A组、B组角膜和泪腺组织中IL-1β和TGF-β1几乎无阳性表达,C组中可见较强染色反应,D组、E组有染色反应；平均光密度值比较C组较A组、B组、D组和E组均显著增高（P<0.05）；D组、E组间无显著性差异（P>0.05）；D组、E组与A组比较差异有显著性（P<0.05）。4. TGF-β1mRNA定量PCR结果：在造模1个月时,C组、D组、E组角膜TGF-β1mRNA表达几乎相等；造模5个月后,A组、C组、D组、E组角膜TGF-β1mRNA表达有差异,D组>A组>E组>C组。在泪腺,造模1个月时,各组TGF-β1mRNA表达有差异,E组>C组>D组；造模5个月后,除E组表达有所下降外,其余组表达增加,D组>E组>C组>A组。结论：采用双侧睾丸及附睾切除的方法可成功建立了雄激素水平下降所致干眼症的动物模型,密蒙花总黄酮对干眼症有治疗作用,而增加mRNA的表达致TGF-β1增加并抑制炎症因子IL-1β是其治疗干眼症的机制之一。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词表
• 引言
• 1 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 2 实验方法
• 2.1 实验分组
• 2.2 雄激素缺乏导致干眼症动物模型的建立
• 2.3 给药方法
• 2.4 观察指标及方法
• 2.5 统计学分析方法
• 3 实验结果
• 3.1 造模后SchimerⅠ试验、泪膜破裂时间及角膜荧光素染色检测结果
• 3.2 电镜观察泪腺超微结构变化
• 3.3 免疫组化结果
• 1mRNA提取、反转录及其定量PCR测试结果'>3.4 TGF-β₁mRNA提取、反转录及其定量PCR测试结果
• 4 讨论
• 4.1 干眼症动物模型的建立
• 4.2 雄激素下降导致的干眼症与慢性炎症的关系
• 1和IL-1β水平的影响'>4.3 密蒙花总黄酮对干眼症中TGF-β₁和IL-1β水平的影响
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录1 附图
• 附录2 文献综述