临床型乳房炎奶牛乳清蛋白质双向电泳图谱的建立及质谱分析

论文摘要

本研究应用双向凝胶电泳（2-DE）技术,对临床型乳房炎奶牛和健康奶牛的乳清蛋白质进行分离,用硝酸银染色和考马斯亮蓝染色两种方法进行了染色,获得两种乳清蛋白质2-DE图谱,同时通过PDQuest 7.4软件对蛋白质电泳图谱进行斑点检测和匹配,并结合人工校正分析,应用质谱分析技术,对差异代表进行鉴定,得到如下结果。1、在等电点为3-10的区域内,检测到乳房炎奶牛乳清蛋白质硝酸银染色图谱111±6个蛋白质点,健康奶牛蛋白质样142±4个蛋白质点;考马斯亮蓝染色图谱检测到乳房炎奶牛蛋白质样80±4个蛋白质点,健康奶牛蛋白质样82±3个蛋白质点。且硝酸银染色和考马斯亮蓝染色两种方案所获得的图谱都具有良好的重复性和分辨率。2、对乳房炎奶牛与健康奶牛乳清蛋白质图谱匹配比较后发现:乳清蛋白质硝酸银染色图谱中有31个蛋白质点的表达存在明显差异（蛋白质差异表达量在3倍以上）,其中乳房炎乳清中蛋白表达发生明显上调的蛋白点7个,明显下调的蛋白点有24个;考马斯亮蓝染色图谱中有13个蛋白质点的表达存在明显差异（蛋白质差异表达量在3倍以上）,其中乳房炎乳清中蛋白表达明显上调的蛋白点6个,明显下调的蛋白点有7个。且硝酸银染色图谱匹配率为91.41%,考马斯亮蓝染色图谱匹配率为94.32%。3、应用质谱技术（MS）对临床型乳房炎奶牛和健康奶牛乳清差异蛋白质进行MS鉴定,得出以下4种蛋白质:casocidin-I（casein-alpha s2 derived antibacterial peptide）;α-乳白蛋白（Chain F, Crystal Structure Of Bovine Alpha-Lactalbumin）;β-乳球蛋白（Chain B, Bovine Beta-Lactoglobulin, Lattice ）;乳铁蛋白（Structure Of Diferric Bovine Lactoferrin At 2.8 Angstroms Resolution）。

论文目录

• 摘要
• SUMMARY
• 前言
• 第一章 文献综述蛋白质组学在奶牛乳房炎研究中的应用
• 1.1 奶牛乳房炎研究现状
• 1.1.1 乳房炎的定义
• 1.1.2 奶牛乳房炎分类
• 1.1.3 乳房炎炎症的基本指标
• 1.1.4 奶牛乳房炎的病原
• 1.1.5 乳房炎病原菌致病机理研究进展
• 1.1.6 乳房炎的临床症状
• 1.1.7 乳房炎的检测与诊断
• 1.1.8 奶牛乳房炎防治
• 1.2 蛋白质组学及其在奶牛乳房炎研究中的应用
• 1.2.1 蛋白质组学概念
• 1.2.2 蛋白质组学研究技术
• 1.2.3 白细胞蛋白质组学
• 1.2.4 病原微生物蛋白质组学
• 1.2.5 乳蛋白质组学
• 1.2.6 蛋白质组学在乳房炎研究中的应用
• 第二章 乳清蛋白质组的双向电泳
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 试验动物及样品的采集
• 2.1.2 主要化学试剂
• 2.1.3 主要仪器设备
• 2.1.4 样品的制备
• 2.1.5 等点聚焦（ISOELECTRIC FOCUSING, IEF）
• 2.1.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）
• 2.1.7 染色
• 2.1.8 图像采集与分析
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.3.1 乳样的处理
• 2.3.2 IEF
• 2.3.3 染色
• 2.3.4 染色斑点检测与分析
• 第三章 乳清差异蛋白质组的LC-MS/MS 鉴定
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 试验样品
• 3.1.2 主要化学试剂及仪器设备
• 3.1.3 样品酶解
• 3.1.4 肽混合物的质谱检测:
• 3.2 结果
• 3.2.1 乳清差异表达蛋白质的鉴定
• 3.2.2 差异表达蛋白质分析
• 3.3 讨论
• 3.3.1 奶牛乳清蛋白质研究方法
• 3.3.2 临床型乳房炎奶牛乳清中表达量上调的相关蛋白质
• 3.3.3 临床型乳房炎奶牛乳清中表达量下调的相关蛋白质
• 结论
• 致 谢
• 参考文献
• 作者简介
• 导师简介