HGF对人脐静脉和淋巴管的内皮细胞及人结肠癌细胞的增殖和移行行为的影响

论文摘要

结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,占消化道恶性肿瘤的第二位。结直肠癌治疗失败的主要原因是癌细胞发生了血行或淋巴转移。研究显示,结直肠癌的转移不仅与癌细胞的侵袭能力有关,还与肿瘤内血管、淋巴管的新生密切相关。大量资料表明,在人类结直肠癌中存在着血管、淋巴管的新生,而且血管、淋巴管的密度与肿瘤淋巴结转移及预后相关。抑制血管新生可以减少肿瘤的血供,诱导肿瘤细胞的凋亡,减少转移的机率;抑制淋巴管新生可以降低淋巴结转移率,改善预后。寻找有效的治疗靶点正在成为该领域的一个研究热点,其中肝细胞生长因子HGF尤其引人注目。肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor,HGF）,又称离散因子（scatter factor,SF）,是目前发现的具有最强活性的刺激肝细胞再生的细胞因子,曾误以为它就是特异性肝细胞生长因子。但实际上,它还对多种细胞具有促有丝分裂、促移动、促形态发生的活性。HGF发挥其各种生物学作用,主要通过其受体c-Met实现,c-Met为具有酪氨酸蛋白激酶活性的膜受体,由原癌基因c-met编码,属于肝细胞生长因子受体家族中的一员。已有研究证实HGF在肿瘤细胞的侵袭和转移过程中起重要作用,而且在血管形成中也发挥重要作用。最近有研究显示,HGF还是淋巴管生成的促进因子。而血管、淋巴管的新生与肿瘤的侵袭和转移密切相关。研究显示,血管和淋巴管的形成是由内皮细胞的增殖、移行和成管等若干步骤组成的。但迄今,HGF在淋巴管形成过程中的作用及机制尚不清楚,HGF在人结直肠癌血管、淋巴管新生中的作用机制尚缺乏系统的研究。血管内皮生长因子（VEGF）家族中的VEGF-A是肿瘤血管生成的重要因子;而VEGF-C和VEGF-D则是肿瘤淋巴管新生和淋巴结转移的重要调控因子。所以,探索肿瘤细胞如何调控VEGF家族的产生进而促进肿瘤细胞转移以及促进肿瘤血管、淋巴管生成就成为抗肿瘤脉管生成研究的重点问题。已有研究证实HGF可以上调结直肠癌VEGF-A的表达,但HGF能否调控结直肠癌细胞VEGF-C和VEGF-D的表达于国内外尚未见报道。本实验采用形态与机能相结合的方法系统检测HGF对人脐静脉内皮细胞ECV-304,人真皮淋巴管内皮细胞（HDLEC）,人结肠癌细胞SW480、SW620的增殖、移行行为以及HGF对SW480,SW620的VEGF-A,VEGF-C,VEGF-D表达的影响,以期为结直肠癌抗脉管生成寻找治疗新靶点。本实验分两部分。一HGF对人脐静脉内皮细胞ECV-304、人真皮淋巴管内皮细胞（HDLEC）的增殖、移行的影响本实验采用MTT法分析HGF对细胞增殖的作用,流式细胞术检测HGF对细胞周期的影响,基底膜重建实验观察HGF对细胞移行的影响,透射电子显微镜观察加入HGF后细胞超微结构的变化。结果显示:HGF能促进ECV-304、HDLEC增殖。HGF对ECV-304的促增殖作用呈质量浓度依赖关系。而对HDLEC的促增殖作用并不随着HGF浓度的增加而增强。流式细胞术结果显示,与对照组相比,ECV-304和HDLEC的HGF组中的G0 /G1期细胞均减少,S期细胞增多,G2/M期细胞增多。ECV-304增殖指数由对照组的37.8%增至47.5%,HDLEC增殖指数则由对照组的27.3%增至37.1%。HGF也能促进ECV-304、HDLEC移行。HGF≥10ng/ml时能有效促进ECV-304移行并且呈质量浓度依赖关系;HGF能有效促进HDLEC移行且呈质量浓度依赖关系。透射电子显微镜观察ECV-304和HDLEC细胞的超微结构发现,加入HGF后,两种细胞内的微丝均增多。二HGF对人结肠癌细胞SW480和SW620的增殖、移行及VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D表达水平的影响本研究采用MTT法分析HGF对细胞增殖的作用。流式细胞术检测HGF对细胞周期的影响。基底膜重建实验观察HGF对细胞移行的影响。透射电子显微镜观察加入HGF后细胞超微结构的变化。应用Western Blotting检测两种细胞有无c-Met的表达以及加入HGF前后VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D表达水平的变化。结果显示,HGF能促进SW480和SW620增殖。HGF≥10ng/ml时开始促进SW480和SW620增殖,随着HGF浓度的增高SW620细胞增殖缓慢,但对SW480增殖作用不随着HGF浓度的增加而增强。流式细胞术结果显示,与对照组相比,SW480的HGF组中的G0 /G1期细胞减少,S期细胞增多,G2/M期细胞增多,但HGF对SW620细胞周期的影响不明显。SW480增殖指数由对照组的42.3%增至46.9%,SW620增殖指数由对照组的32.0%增至33.8%。HGF也能促进SW480和SW620移行,基底膜重建实验显示,HGF能明显促进SW480、SW620移行且呈质量浓度依赖关系。透射电子显微镜观察SW480和SW620细胞的超微结构发现,加入HGF后,两种细胞内的微丝均增多。Western Blotting结果显示,HGF的特异性受体c-Met表达于SW480和SW620细胞,加入HGF上调了SW480和SW620细胞的VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D的表达水平。结论1 HGF可以促进人脐静脉内皮细胞ECV-304和人真皮淋巴管内皮细胞（HDLEC）的增殖和移行。HGF对二种细胞的促移行作用相似,均呈质量浓度依赖性,而促增殖作用有所不同。2 HGF可以促进人结肠癌细胞SW480、SW620的增殖和移行作用。HGF对二种细胞的促移行作用相似,均呈质量浓度依赖性,而促增殖作用有所不同。3 HGF可以上调SW480和SW620细胞的VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D的表达水平。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 HGF 对人脐静脉和淋巴管的内皮细胞及人结肠癌细胞的增殖和移行行为的影响
• 第一部分 HGF 对人脐静脉内皮细胞ECV-304、人真皮淋巴管内皮细胞的增殖、移行的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 HGF对人结肠癌细胞系SW480，SW620的增殖、移行及VEGF-A,VEGF-C,VEGF-D 表达的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 结直肠癌淋巴管新生研究进展
• 致谢
• 个人简历