论文摘要
大肠杆菌感染是引起腹泻最重要的因素之一。在许多发展中国家,肠毒素大肠杆菌ETEC是导致婴幼儿腹泻致严重脱水的第二大病原菌（仅位于轮状病毒之后）,ETEC也是旅行者腹泻的最常见病原菌。因此,一个安全有效的抵抗ETEC腹泻的疫苗对公众健康是非常重要的。现已知ETEC的两种抗原—定居因子抗原（colonization factor antigens,CFAs）和肠毒素（enterotoxins）参与了腹泻过程。ETEC菌体表面的菌毛（又称定居因子抗原）是重要的致病因子,ETEC感染宿主后,正是靠定居因子粘附干宿主小肠上皮细胞,经定居、繁殖产生肠毒素而致病。迄今为止,了解得比较清楚的菌毛抗原包括定居因子抗原I （CFA/I）、定居因子抗原II （CFA/ II）和定居因子抗原IV （CFA/ IV） [1]。其中CFA/I是一种优势血清型定居因子,其相应抗体在阻止病原体在宿主小肠定居而引起腹泻方面起重要怍用,在许多地方流行腹泻区,它是许多疫苗的一个重要组成成分。肠毒素是ETEC产生的毒性分泌蛋白,有不耐热肠毒素（heat—labile entemtoxin,LT）和耐热肠毒素（heat—stable entemtoxin,sT）两种。CT和LT有很强的免疫原性和佐剂活性。LTB为无毒性的LT的B亚单位,也和CTB一样有很强的免疫原性和佐剂活性。本研究中选用LTB作为粘膜免疫佐剂。ETEC疫苗要求能够中和大多数ETEC菌株的毒力因子抗原,目前普遍认为一个合理的大肠杆菌疫苗应该包括三个主要的菌毛抗原即CFA/I,CFA/II,和CFA/IV以及具有免疫原性的不耐热肠毒素LT。目前ETEC研究热点集中在三个方向:1.免疫方式由传统的肌肉、皮下等转为粘膜免疫;2.寻求粘膜佐剂,常用CT和LT;3.表达载体由传统的有毒转向减毒或无毒载体。双歧杆菌是人类肠道的自然宿主且可以粘附于肠道上皮细胞。因此,本研究的目的是将双歧杆菌发展成一个表达CFA/I的口服活疫苗的抗原表达系统。目的:构建携带ETEC CFA/I的双歧杆菌重组疫苗（即pBEX-CFA/I）,然后将此载体疫苗免疫SD大鼠,检测其在大鼠体内诱导的体液和粘膜免疫应答,并与双歧杆菌重组LTB（即pBES-LTB）共免疫,检测其粘膜免疫佐剂的效应。方法:（1）以pGEX-5x-1为基础,构建穿梭表达载体pBEX-CFA/I。将其电转化婴儿双歧杆菌,SDS-PAGE验证蛋白的表达。通过家兔肠袢实验验证表达蛋白的安全性。（2）用双歧杆菌重组载体疫苗免疫SD大鼠:随机分四组分别为PBS、pBES-LTB、pBEX-CFA/I和pBES-LTB+pBEX-CFA/I组,每组12只,免疫三次（0,10,17天）,并于0,7,10,14,17,22和27天采血和粪便样本,ELISA检测其特异抗体水平。（3）在第27天,每组一半大鼠腹腔感染致死剂量ETEC毒株H10407,连续观察20天,计算其存活力。另一半鼻饲ETECH10407,观察其肺部感染情况。结果:（1）CFA/I蛋白在双歧杆菌中成功表达,其表达蛋白经家兔肠袢实验证实是无毒的。（2）ELISA结果表明:pBEX-CFA/I与pBES- LTB疫苗联合免疫组的大鼠比其它单独免疫组产生了更强烈的血清IgG和粪便IgA抗体（P<0.05）。CFA/I免疫组和LTB免疫组间无显著性差别（P>0.05）。（3）腹腔攻毒保护实验结果证实, pBEX-CFA/I + pBES-LTB免疫组的SD大鼠保护性比单独免疫组的好,单独口服天然双歧杆菌和PBS的未免疫组无保护性。（4）ETEC鼻饲实验结果表明:pBEX-CFA/I+pBES-LTB免疫组及pBEX-CFA/I单独免疫的SD大鼠肺部均无病理变化。结论:（1）双歧杆菌可以作为ETEC重组口服活疫苗的表达载体系统,该口服疫苗表达系统开辟了ETEC疫苗研究的新方向;（2）重组双歧杆菌表达-CFA/I单独接种对ETEC的粘附和感染有免疫保护作用;（3）双歧杆菌-CFA/I和双歧杆菌-LTB联合免疫,可明显提高CFA/I的抗体滴度,并使动物获得更好的保护力。
论文目录
相关论文文献
- [1].日喀则绵羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定[J]. 西藏农业科技 2019(04)
- [2].浅谈溶血性曼氏杆菌研究进展[J]. 广西畜牧兽医 2020(01)
- [3].双歧杆菌三联活菌散治疗感染性腹泻的疗效观察[J]. 中国现代医生 2020(04)
- [4].西咪替丁联合双歧杆菌三联活菌散治疗早产儿坏死性小肠结肠炎的疗效观察[J]. 首都食品与医药 2019(22)
- [5].基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术在分枝杆菌检测中的应用进展[J]. 新发传染病电子杂志 2017(03)
- [6].双歧杆菌研究进展及应用前景[J]. 中国生物制品学杂志 2017(02)
- [7].食品中双歧杆菌显色培养基的研制[J]. 食品工业 2017(02)
- [8].双歧杆菌对人体的健康作用[J]. 临床医药文献电子杂志 2016(35)
- [9].双歧杆菌分类、生理功能及应用研究进展[J]. 生物产业技术 2017(03)
- [10].美沙拉嗪联合双歧杆菌三联活菌治疗溃疡性结肠炎患者的疗效分析[J]. 临床医药文献电子杂志 2017(37)
- [11].甲硝唑联合双歧杆菌治疗抗生素相关性腹泻疗效分析[J]. 基层医学论坛 2014(35)
- [12].应用双歧杆菌治疗急性肠炎40例临床疗效分析[J]. 医学理论与实践 2015(04)
- [13].猪链球菌与巴氏杆菌混合感染的治疗与控制[J]. 当代畜牧 2015(05)
- [14].双歧杆菌感受态细胞的制备和电转化条件的研究[J]. 中国微生态学杂志 2013(10)
- [15].双歧杆菌四联活菌片联合蒙脱石散治疗儿童抗生素相关性腹泻疗效观察[J]. 中国处方药 2020(03)
- [16].双歧杆菌四联活菌片联合锌制剂治疗小儿腹泻的临床效果[J]. 实用临床医学 2020(01)
- [17].乳果糖与双歧杆菌四联活菌治疗功能性便秘的效果评价[J]. 中国社区医师 2020(13)
- [18].牛溶血曼氏杆菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 中国兽医学报 2020(06)
- [19].双歧杆菌及其产品缓解肠炎症状的研究进展[J]. 乳业科学与技术 2020(04)
- [20].临床分离苍白杆菌和假苍白杆菌的质谱研究[J]. 中国热带医学 2019(03)
- [21].急性肠炎给予双歧杆菌联合诺氟沙星治疗的效果观察[J]. 心理月刊 2019(22)
- [22].探究双歧杆菌治疗婴幼儿轮状病毒肠炎的疗效[J]. 临床医药文献电子杂志 2016(35)
- [23].双歧杆菌三联活菌联合美沙拉嗪治疗溃疡性结肠炎患者的疗效[J]. 医疗装备 2017(12)
- [24].双歧杆菌四联活菌联合美沙拉嗪治疗溃疡性结肠炎的效果和安全性分析[J]. 河南医学研究 2017(11)
- [25].双歧杆菌四联活菌片治疗腹泻型肠易激综合征患者的疗效[J]. 中国药物经济学 2017(09)
- [26].蒙脱石散与双歧杆菌三联活菌散治疗小儿腹泻的应用价值[J]. 临床医药文献电子杂志 2017(45)
- [27].双歧杆菌胞外多糖研究进展[J]. 中国微生态学杂志 2017(10)
- [28].人类免疫缺陷病毒与分枝杆菌合并感染的临床探讨[J]. 临床医药实践 2016(05)
- [29].鸭源鸡杆菌整合子及其与耐药性的相关性分析[J]. 畜牧兽医学报 2016(08)
- [30].联用双歧杆菌四联活菌片和蒙脱石散治疗小儿腹泻的效果研究[J]. 当代医药论丛 2016(19)
标签：产肠毒素型大肠杆菌论文; 双歧杆菌论文; 口服活疫苗论文;