益气活血法和补肾生髓法对体外培养和脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化的影响

论文摘要

目的依据中医脑髓学说、气血相关理论和缺血性脑卒中“气虚血瘀”病机学说,借助益气活血法代表方脑络欣通和补肾生髓法代表方左归丸,比较观察两种不同中医治法对诱导神经干细胞增殖、分化,以及神经营养因子表达水平的影响,从神经干细胞增殖、分化和调控角度探讨不同中医治法在修复缺血性脑损伤中的作用及其机制。方法1分离E14胎鼠大脑皮质及皮质下组织,通过原代细胞培养、传代、单细胞克隆和免疫细胞荧光化学方法,用神经干细胞的特异性巢蛋白单克隆抗体（神经上皮干细胞蛋白Nestin）、增殖细胞单克隆抗体（5-溴脱氧尿苷嘧啶BrdU）、神经细胞的特异性抗体（神经元特异性烯醇化酶NSE、胶质纤维酸性蛋白GFAP、半乳糖脑苷脂Gal-C）鉴定神经干细胞的自我更新增殖能力和多向分化潜能。2分别采用脑络欣通药物血清和左归丸药物血清培养大鼠胚胎神经干细胞,观察其促增殖效应和诱导分化效应,应用相差显微镜和免疫荧光染色对其进行比较观察。3线栓法制作急性局灶性脑缺血再灌注损伤动物模型,动物随机分为假手术组、模型组、脑络欣通组及左归丸组4组。在相应时间点进行脑缺血范围测定和神经缺损体征评分。在脑缺血再灌注1d、3d、7d后的3个不同时间点,应用免疫组织化学或免疫荧光化学技术,进行Nestin、BrdU单标染色及BrdU/GFAP、BrdU/NSE双标染色,分析比较各组大鼠脑组织中阳性细胞的表达情况。4线栓法制作急性局灶性脑缺血再灌注损伤动物模型,动物随机分为假手术组、模型组、脑络欣通组及左归丸组4组。在脑缺血再灌注1d、3d、7d后的3个不同时间点,应用免疫组织化学技术,进行脑源性神经营养因子（BDNF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）免疫组化显色,在大鼠脑缺血后脑内有神经干细胞增生的相关区域,分析比较脑缺血后以及应用脑络欣通和左归丸后BDNF、bFGF的表达情况。结果1从胎鼠大脑皮质及皮质下分离的组织,经原代和传代培养均可形成细胞克隆,并具有增殖的能力,表达巢蛋白抗原和增殖细胞抗原;在血清诱导下,分化后的细胞表达3种神经细胞（神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞）的特异性抗原。2脑络欣通药物血清和左归丸药物血清均可诱导绝大多数神经干细胞分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞;前者诱导干细胞分化的进程虽比后者要慢,但其分化的神经元在细胞形态学上与发育成熟的神经元更为接近。此外,两者还能一定程度上促进培养的神经干细胞增殖,以后者促进神经干细胞增殖的效应较为显著。3脑络欣通组和左归丸组均能缩小大鼠脑缺血范围,改善神经功能缺损体征,脑络欣通组作用强于左归丸组。脑缺血再灌注损伤后,Nestin、BrdU在不同时间点、在缺血侧的不同脑区出现程度不等的表达。与模型组比较,两治疗组Nestin、BrdU免疫阳性表达明

论文目录

• 目录
• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩略词表
• 上篇 文献综述
• 综述一 神经干细胞与缺血性脑损伤
• 综述二 中医药促进缺血性脑损伤中枢神经再生的研究现状和思路
• 下篇 实验研究
• 一 前言
• 二 研究背景
• 三 立题依据
• 四 研究内容
• 实验一 大鼠胚胎脑源性神经干细胞的分离培养和鉴定
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 实验二 脑络欣通和左归丸药物血清对体外培养的大鼠神经干细胞增殖分化的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 实验三 脑络欣通和左归丸对脑缺血再灌注损伤大鼠内源性神经干细胞增殖分化的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 实验四 脑络欣通和左归丸对脑缺血再灌注损伤大鼠脑源性神经营养因子和碱性成纤维细胞生长因子表达的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 综合讨论
• 附图
• 致谢
• 个人简历