重组人HMGB1蛋白主动免疫对小鼠脓毒症的预防效应

论文摘要

背景：脓毒症早期起关键作用的是细胞因子。由于TNF-α和IL-1p等为早期一过性释放的致炎因子,因此针对TNF-α或者IL-1p等致炎介质的治疗窗口期非常短暂,并且对于炎症晚期所出现的脓毒症也显得无能为力。新发现的晚期炎症介质HMGB1,其促炎功能和动力学特点,使得它比一些早期炎症介质更具有潜在临床应用价值。目前很多研究者尝试采用各种措施来拮抗晚期炎症介质HMGB1的表达与释放,并取得了值得肯定的效果。因此我们尝试使用主动免疫的方法,探究主动免疫是否对脓毒症有预防效应。方法：通过分子生物学方法构建人HMGB1原核表达载体,并使用乳糖诱导表达得到重组人HMGB1蛋白；使用重组HMGB1对小鼠进行免疫；间接ELISA方法检测小鼠抗血清效价,并使用效价稳定后的小鼠血清为一抗进行Western blot检测；CLP模型检测免疫小鼠对脓毒症的预防效应；H&E染色确定小鼠器官病理学变化；ELISA检测小鼠血浆中MGB1的含量。结果：构建得到带有His标签的HMGB1原核表达载体（pET28a-His-HMGBl）;经乳糖诱导表达得到较纯的可溶重组人HMGB1蛋白；间接ELISA和Western blot检测共同确定小鼠经免疫后抗血清效价达到稳定；CLP模型检测发现,免疫组小鼠存活率显著提高,组织器官得到有效保护,且血浆中HMGB1含量较未免疫组小鼠有显著下降。结论：重组人HMGB1蛋白免疫后对小鼠脓毒症有预防效应,这为进一步探究主动免疫预防脓毒症奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 脓毒症概述
• 1.1.1 脓毒症发病机制研究概述
• 1.1.2 脓毒症的治疗策略概述
• 1.1.3 结论
• 1.2 HMGB1概述
• 1.2.1 HMGB1的释放
• 1.2.2 HMGB1与细胞表面蛋白的结合
• 1.2.3 HMGB1在体外对炎症的介导作用
• 1.2.4 HMGB1在体内介导炎症反应
• 1.2.5 HMGB1在体内的积累
• 1.2.6 胞外HMGB1在致死性全身炎症中的作用
• 第2章 研究假设
• 第3章 重组人HMGB1蛋白主动免疫对小鼠脓毒症的预防效应
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 实验动物
• 3.1.2 实验试剂
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 重组人HMGB1蛋白的获得
• 3.2.2 重组人HMGB1蛋白免疫Bal b/c小鼠及免疫效果测定
• 3.2.3 重组人HMGB1蛋白免疫小鼠安全性评价
• 3.2.4 CLP模型检测免疫小鼠对脓毒症的预防效应
• 3.2.5 组织学检测免疫小鼠对脓毒症的预防效应
• 3.2.6 血液学检测重组HMGB1蛋白免疫对小鼠脓毒症的预防效应
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 人HMGB1的序列
• 3.3.2 人HMGB1基因原核表达载体图谱
• 3.3.3 人HMGB1克隆载体菌落PCR鉴定结果图
• 3.3.4 人HMGB1原核表达载体的双酶切结果图
• 3.3.5 重组人HMGB1蛋白的原核表达
• 3.3.6 重组人HMGB1免疫小鼠安全性检测结果
• 3.3.7 免疫组小鼠抗血清效价测定
• 3.3.8 抗人HMGB1抗血清特异性鉴定
• 3.3.9 小鼠经重组人HMGB1蛋白免疫后能提高CLP模型的存活率
• 3.3.10 重组人HMGB1免疫能有效保护脓毒症小鼠的器官
• 3.3.11 重组人HMGB1蛋白免疫后能显著降低CLP小鼠血清中HMGB1的含量
• 3.4 讨论
• 附录
• 试剂配制
• 主要仪器设备
• 参考文献
• 在读期间发表的学术论文及研究成果
• 致谢