不同浓度医用臭氧对大鼠星形胶质细胞影响的体外观察

论文摘要

目的:体外培养大鼠星形胶质细胞（Ast）并观察在不同浓度医用臭氧（O2-O3）作用后细胞形态、细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平及乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、死亡细胞百分比的变化,探讨较短时间内医用臭氧对大鼠Ast功能及形态的影响,评价医用臭氧的神经毒性。方法:参照McCarthy和Dvellis的方法,通过胰酶消化、差速培养、传代纯化等技术体外培养大鼠Ast并进行鼠抗胶原纤维酸性蛋白（GFAP）免疫细胞化学鉴定;大鼠Ast传代接种入24孔培养板,分为7组（n=7）:空白对照组（C组）,不加干预;纯氧组（O2组）:加入400μL纯氧作用20min后的完全培养基;医用臭氧O2-O310组、O2-O320组、O2-O340组、O2-O360组、O2-O380组分别加入400μL的10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL医用臭氧作用20min后的完全培养基,分别于2h、4h时点观察细胞形态、收集细胞悬液及破碎细胞后黄嘌呤氧化酶法测定细胞SOD水平、硫代巴比妥酸法测定细胞MDA水平、简易测定法测定细胞LDH漏出率、台盼兰染色计数死亡细胞百分比。结果:（1）相差显微镜下形态观察Ast传3～4代后几呈单一的扁平多角形细胞,并且培养细胞95%以上为GFAP染色阳性细胞。相差显微镜下,与C组比较,O2-O360组及O2-O380组细胞出现胞体肥大、空泡、变性颗粒、突起增多等损伤表现。（2）SOD水平变化与C组比较,除O2组及O2-O310组外各组细胞SOD升高（p＜0.05或0.01）,O2-O340组较O2-O310组、O2-O320组均升高（p＜0.01）;与O2,组比较结果和与C组比较结果相同;与臭氧作用2h比较,除O2-O310组外各医用臭氧组在4h时点均降低（p＜0.05或0.01）。（3）MDA水平变化在2h时点,与C组比较,O2-O340组、O2-O360组及O2-O380组均升高（p＜0.05或0.01）,O2-O380组较O2-O360组升高（p＜0.01）;在4h时点,与C组比较,O2-O320组、O2-O340组降低（p＜0.05）,O2-O380组升高（p＜0.01）;与O2组比较结果和与C组比较结果相同;与2h时点比较,各医用臭氧组4h时点均降低（p＜0.05或0.01）。（4）LDH漏出率变化在2h时点,与C组比较,O2-O320组、O2-O340组降低（p＜0.05）,O2-O380组升高（p＜0.01）;在4h时点,与C组比较,O2-O340组降低（p＜0.05）,O2-O360组、O2-O380组升高（p＜0.01）,O2-O380组较O2-O360组升高（p＜0.01）;与O2组比较结果和与C组比较结果相同;与2h时点比较,O2-O360组和O2-O380组4h时点均升高（p＜0.05）。（5）死亡细胞百分比变化在2h时点,与C组比较,O2-O360组、O2-O380组升高（p＜0.01）,与O2组比较结果和与C组比较结果相同,O2-O380组较O2-O360组升高（p＜0.05）;在4h时点,与C组比较,O2-O360组、O2-O380组升高（p＜0.01或0.05）,与O2组比较,O2-O380组升高（p＜0.01）,O2-O380组较O2-O360组升高（p＜0.01）;与2h时点比较,O2-O360组和O2-O380组4h时点均升高（p＜0.05或0.01）。结论:在较短时间内（2h,4h）,浓度为10μg/mL的医用臭氧作用后,大鼠Ast功能形态未发生明显变化;浓度为20μg/mL、40μg/mL的医用臭氧使大鼠Ast的SOD活力升高、LDH漏出率降低,提示对大鼠Ast有一定保护作用;浓度为60μg/mL、80μg/mL的医用臭氧使大鼠Ast的MDA、LDH漏出率及死亡细胞百分比均升高,并且形态观察到细胞明显受损表现,提示对大鼠Ast有损伤作用。

论文目录

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